《動脈粥樣硬化》 二、Hatch-Lee法（同時分離血漿脂蛋白方法）

1．試劑

0.5mol/LEDTA（pH8.0）:186g EDTA-Na2加入去離水950ml，用NaOH調準pH值，再加水到1L。

溶液①（d=1.006）:NaCl 11.40g,0.5ml0.5mol/L EDTA液，加去離子水1l，EDTA可抑制脂蛋白中脂質的氧化。

溶液②（d=1.182）:NaBr24.98g溶于溶液①100ml中。

溶液③（d=1.478）:NaBr78.32溶于溶液②100ml中。

0.15mol/LNaCl,0.3mlEDTA:8.77g NaCl、0.6ml的0.5mol/l EDTA（pH8.0），再加雙蒸水到1L。

d=1.019液：1.851gKBr溶于溶液①100ml中。

d=1.063液：8.343gKBr溶于溶液①100ml中。

d=1.215液：33.496gKBr溶于溶液①100ml中。

以上溶液的密度，必要時用折射儀檢測。

2．操作

取10mlEDTA Na2抗凝（1mg/ml）采血，離心（3000r/min）10min，分離得血漿。取血漿4ml加入容量10ml的超離心管中的底層，上面鋪蓋2ml溶液①(d=1.006)液，20kr/min(26kXg)離心30min(4℃)，不用制動器讓其旋轉減速，以防飄浮物與下浮層相混；取出下層4ml混合血漿待用；超離心管中殘留2ml，再取溶液①2ml沿管壁加入，仔細混勻分散脂蛋白，又加溶液①2ml鋪在表面，20kr/min，4℃，離心1h，取出上層液直至變界處，此即CM組份。再將第一次離心所得的下層4ml混合血漿取出，其上鋪2ml溶液①，40kr/min（100k×g），18℃離心17h，取上層1ml液，此即VLDL組份。再取出1ml至交界處，棄去，將管內剩余的4ml混合液移入另一超離心管內，取2ml溶液②（d=1.182）洗出離心管中殘余的脂蛋白，加入到裝4ml混合液超離心管內，混勻，40kr/min，18℃，離心21h，取出上層（d=1.062）1ml混合液，此即LDL組份。繼續(xù)將中間層1ml除去，殘存的4ml轉入到另一超離心管內，用d=1.478（溶液③）2ml洗滌原管，爾后移入4ml殘存液管內，仔細混勻，40kr/min，18℃，離心41h，上層（d=1.20）部分吸出，即HDL組份。下層為VHDL（very high density Lipoprotein）與其他血漿脂蛋白。LDL與HDL分別對0.15mol/lNaCl-0.3mmol/L EDTA(pH8.0)透析，4℃保存。