《動(dòng)脈粥樣硬化》 一、超速離心法簡(jiǎn)介

為了研究，常需要得到脂蛋白純品并進(jìn)一步分離純化載脂蛋白，迄至目前為止，采用密度梯度超速離心分離純化各種脂蛋白仍是一種很好的方法。

超速離心法可分為制備型和分析型兩種，根據(jù)其所用介質(zhì)密度不同，可以分為等密度離心，密度梯度離心等。根據(jù)所用轉(zhuǎn)頭的類型不同可以分為角頭、甩平頭、垂直頭和區(qū)帶頭離心法。脂蛋白分離中，采用密度梯度超速離心法較多。

離心作用是根據(jù)穩(wěn)定角速度下做圓周運(yùn)動(dòng)的任何物質(zhì)都受到一個(gè)外向的離心力F，這種力的大小取決于角速度（以弧度ω表示）和旋轉(zhuǎn)半徑r（以cm計(jì)算）。

F=ω2r

F常用地球引力表示，稱為相對(duì)離心力（RCF）或者常用“數(shù)字×g”來表示。

RCF=ω2r/980

在使用該公式時(shí)，這些關(guān)系需用“每min轉(zhuǎn)數(shù)（r/min）”表示，這是表示離心機(jī)轉(zhuǎn)動(dòng)速度的普通方式。

由于（r/min）的數(shù)值可轉(zhuǎn)換成弧度，利用ω=π（r/min）/30公式代入上式，得到下述換算式：

RCF-（πr/min）2×r/302/980=（1.119×10-5）（r/min）2·r

對(duì)于在離心轉(zhuǎn)頭中旋轉(zhuǎn)的樣品，估計(jì)其所受到的相對(duì)離心力需要考慮樣品到旋轉(zhuǎn)中心的固定距離（r）。由于轉(zhuǎn)頭的形狀設(shè)計(jì)，離心管中從管頂主管底各點(diǎn)旋轉(zhuǎn)中心的距離是不同的。例如在固定的角式轉(zhuǎn)頭中，作用于離心管頂部和底部的離心力的差別接近一倍。為了計(jì)算相對(duì)離心力的數(shù)值可用平均相對(duì)離心力（RCF平均）來表示，即同一離心轉(zhuǎn)頭頂部和底部所受離心力的平均值。因此，最重要的將是確定半徑（r）的數(shù)值。

形成密度梯度操作，可采用兩種方法，一是利用自動(dòng)形成器，此裝置是在一根管道上裝有兩個(gè)容器，各以T型管與此管道相通，兩容器分別裝入輕液和重液，按比例進(jìn)入混合器，并用蠕動(dòng)泵將溶液注入超離心管內(nèi)，形成不同密度液，加入到超離心管中，使其離心管中液體成密度梯度離心分布。二是采用手工操作，先配成不同密度溶液，人工一層層鋪蓋到超離心管內(nèi)，使超離心管中成為不同密度梯度的溶夜。

超速離心后樣品的收集可根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)條件采用下述幾種方法。

（1）切割法：在固定的刀架上，將已離心好的樣品管放在所要求的高度（按管內(nèi)分離區(qū)帶確定）用刀切斷離心管，取出樣品。

（2）虹吸法：用蠕動(dòng)泵或吸管將樣品從上至下逐層按區(qū)帶吸出并分管收集。泵管或吸管注意每區(qū)帶一管，不能混用。

（3）穿剌法：用針頭在超速離心管底部穿一小孔，讓液體從底部流出，并按區(qū)帶分部收集。

分管收集到的各區(qū)帶樣品，可采用折光儀，測(cè)出折光系數(shù)，從表中查出相應(yīng)溶液的水合密度，從而確認(rèn)各組份的分布樣品的水合密度。