中藥毒性的研究方法解析

趙國平 錢三旗 暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院　 何清湖 湖南中醫(yī)藥大學(xué)

中藥毒性的內(nèi)涵應(yīng)包括單味藥毒性和配伍后的毒性兩方面。在本草文獻(xiàn)中，毒有四個(gè)意義：一指藥物的總稱，如《景岳全書》云“凡可辟邪安正者，皆可稱為毒藥”；二指藥物的偏性，如《類經(jīng)》：“藥以治病，因毒為能，所謂毒藥，以氣味之有偏也”；三指藥物作用的強(qiáng)弱不同，《素問·五常政大論》根據(jù)藥物偏性的大小和作用的強(qiáng)弱，提出了“大毒治病，十去其六，常毒治病，十去其七，小毒治病，十去其八，無毒治病，十去其九”；四指藥物的毒副作用。我們所說的中藥毒性是指藥物對機(jī)體的損害性，包括急性、亞急性、慢性和特殊毒性（致癌、突變、致畸胎等）；同時(shí)還包括了中藥的副作用即在常用劑量時(shí)藥物出現(xiàn)與治療需要無關(guān)的不適反應(yīng)。傳統(tǒng)的中藥文獻(xiàn)對中藥毒性的分級有三級和四級之分，三級分類的如新世紀(jì)《中藥學(xué)》教材、《中國藥典》2005版、《中藥大辭典》第一、二版，將中藥毒性大毒、有毒、小毒；而《有毒中藥大辭典》則分為劇毒、大毒、有毒、小毒四類。中藥毒性研究一般有以下方法。

有毒成分及毒理研究方法 是中藥毒性研究最常用的方法。主要是在中藥成分中提取、分離毒性成分，進(jìn)行相關(guān)毒性實(shí)驗(yàn)，如在含生物堿的中藥中已知的有毒成分有：川烏、草烏、附子、天雄、雪上一枝蒿等品種中的烏頭堿；雷公藤和昆明山海棠中的雷公藤堿；馬錢子中的番木鱉堿；曼陀羅、洋金花的莨菪堿；苦楝子中的苦楝堿；麻黃中的麻黃堿；光慈菇、山慈菇中的秋水仙堿等。其毒理作用主要是損害神經(jīng)系統(tǒng)。外周迷走神經(jīng)和感覺神經(jīng)中毒，常先呈異常興奮后抑制，能直接影響心臟功能，并發(fā)其他臟器的變性壞死；中樞神經(jīng)中毒，可引起視丘、中腦、延腦、脊髓的病理改變；呼吸中樞中毒可引起呼吸麻痹窒息。再如在含有苷類的中藥中，已知的毒性成分有：洋地黃、萬年青、八角楓、蟾酥、夾竹桃等品種中的強(qiáng)心苷，可直接作用于心臟，引起心肌收縮的增強(qiáng)，心率減慢；木通、黃藥子、商陸等皂苷成分，對局部有刺激作用，并能抑制呼吸，損害心臟、腎臟，尚有溶血作用；白果中的銀杏酸和銀杏酚，苦杏仁、桃仁、郁李仁、木薯、瓜蒂等品種中的苦杏仁甙，水解后可析出氫氰酸，能迅速與細(xì)胞線粒體中氧化型細(xì)胞色素酶的三價(jià)鐵結(jié)合，阻止細(xì)胞的氧化反應(yīng)；芫花、廣豆根等品種中的黃酮苷，可刺激胃腸道和對肝臟的損害，引起惡心嘔吐、黃疸等癥狀。

中藥毒代動(dòng)力學(xué)研究方法　毒代動(dòng)力學(xué)是運(yùn)用藥代動(dòng)力學(xué)的原理和方法，定量地研究毒性劑量下藥物在動(dòng)物體內(nèi)的吸收、分布、代謝、排泄過程和特點(diǎn)，進(jìn)而探討藥物毒性發(fā)生和發(fā)展的規(guī)律性的一門科學(xué)。其主要目的是：揭示在毒性試驗(yàn)條件下藥物所達(dá)到的全身暴露與毒性發(fā)生的內(nèi)在聯(lián)系；比較動(dòng)物與人的全身暴露來解釋毒理試驗(yàn)數(shù)據(jù)的價(jià)值；為臨床前毒性研究的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（如動(dòng)物種屬、試驗(yàn)劑量和用藥方案的設(shè)計(jì)）提供依據(jù)。

細(xì)胞毒性試驗(yàn)MTT法 這是借助于細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)直接觀察中藥在細(xì)胞學(xué)水平上的毒性反應(yīng)。包括對細(xì)胞、細(xì)胞器形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響和對細(xì)胞整體活動(dòng)的影響等。而MTT法可以快速高效地檢測藥物對細(xì)胞增殖的影響及毒性反應(yīng)。從微觀角度反映中藥毒理作用的生物學(xué)基礎(chǔ)。

中藥血清藥理學(xué)方法 該方法應(yīng)用于中藥毒性研究的尚較少，但直接用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的含藥血清培養(yǎng)細(xì)胞觀察中藥的毒性效應(yīng)，可從微觀角度闡明毒理。為從細(xì)胞分子水平闡明中藥毒性機(jī)理開辟道路，值得借鑒。

分子生物學(xué)技術(shù) 將分子生物學(xué)方法應(yīng)用于中藥毒理學(xué)研究，如對中毒臟器中核酸含量測定，對藥物性損傷的肝細(xì)胞中藥物代謝酶和抗氧化物酶活性的測定、毒理基因組學(xué)和蛋白組學(xué)的探討等，均將有助于從基因分子水平探討中藥毒性產(chǎn)生的機(jī)理與本質(zhì)。

中藥毒性研究必須注意的幾個(gè)問題

1.中藥毒性的相對性 中藥是借助于藥物的偏性糾正疾病的偏性，辨證準(zhǔn)確，效如桴鼓相應(yīng)。如果辨證不確，就會(huì)產(chǎn)生毒副作用。如日本報(bào)道的應(yīng)用小柴胡湯引起間質(zhì)性肺炎的案例，就是一個(gè)很好的說明。而某些藥物如三氧化二砷對正常人使用反映為毒性，而用于急性粒細(xì)胞白血病卻發(fā)揮了很好的治療作用，并未發(fā)生毒副反映。

2.中藥毒性研究的復(fù)雜性 其復(fù)雜性在于中藥多使用制劑粗、用量大、毒性小、起效慢、療程長、靶點(diǎn)多、給藥途徑以口服為主等，給中藥毒理學(xué)的研究帶來了困難。制劑較粗，與對照組在顏色、氣味、用藥量、給藥途徑等方面存在很大的差異，影響了各實(shí)驗(yàn)組間的齊同性；藥量較大，超過實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的胃容量；毒性較低，甚至檢測不出半數(shù)致死量等數(shù)據(jù)；用藥療程長，短期內(nèi)可能無毒性反應(yīng)，有毒性蓄積的傾向；中藥從原藥材到制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)均不夠嚴(yán)格和科學(xué)，使實(shí)驗(yàn)重復(fù)性受到很大的影響；中藥保存條件與保存期與化學(xué)藥品不同；中藥尤其是復(fù)方成分復(fù)雜且難以確定，其毒代動(dòng)力學(xué)研究具有許多困難與特殊性。

3.辨證看待古代文獻(xiàn)毒性的記載 如七情和合中相反的涵義為配伍后能增加毒性，但并不意味著絕對不能配伍。漢末張仲景《金匱要略》中的“甘遂半夏湯”以甘遂與甘草同用；《千金翼方》腎瀝散中烏頭、白蘞同用；《儒門事親》中通氣丸海藻、甘草同用等，經(jīng)過長期臨床使用并未見有毒性反應(yīng)的報(bào)道。高曉山等對病理生理?xiàng)l件下中藥十八反進(jìn)行了系統(tǒng)研究，認(rèn)為十八反是古人在臨床用藥中發(fā)現(xiàn)的問題，病人處于病理生理狀態(tài)，因此十八反應(yīng)限定于專屬的病理生理?xiàng)l件下，廣泛地增加毒性，未必是十八反的普遍規(guī)律。病理生理?xiàng)l件下某些十八反組可顯示毒性增強(qiáng)，死亡率升高或某些不利于治療的情況。川烏與半夏2∶1配伍，8g生藥/kg劑量對于飼喂甲狀腺粉所致陽盛實(shí)驗(yàn)動(dòng)物耐高溫能力有明顯的抑制作用，顯示較明顯毒性增強(qiáng)，而對正常健康動(dòng)物來說，同樣的高溫下生存時(shí)間則較病理模型下長。提出只有在特定的病理生理?xiàng)l件下顯示毒性增強(qiáng)的特點(diǎn)，可能為十八反的主流。

在GLP規(guī)范下開展中藥毒理學(xué)研究。1978年美國FDA頒布了世界上第一部藥品安全性評價(jià)的研究法規(guī)—《藥品非臨床安全研究工作質(zhì)量管理規(guī)范》（Good Lab?鄄oratory Practice，GLP），隨后，GLP管理規(guī)范逐漸成為世界藥品安全性評價(jià)的通行標(biāo)準(zhǔn)，已有約70個(gè)國家和地區(qū)制定了本國的GLP。且隨著GLP規(guī)范的廣泛采用，它所包括的范圍已擴(kuò)大到整個(gè)藥學(xué)、藥效學(xué)研究，可以說所有的非臨床實(shí)驗(yàn)研究（質(zhì)量控制、化學(xué)檢測、分離提取、藥理實(shí)驗(yàn)等）都要遵循其管理原則。所制定的SOP（Standard Operation Procedure）也正逐步向GLP規(guī)范靠擾。

GLP建設(shè)不僅是中藥國際化、產(chǎn)業(yè)化的重要前提與依托，而且是對整個(gè)中醫(yī)藥研究工作的管理與方法學(xué)示范。以其軟件建設(shè)SOP文件制作為例，包含了以下13個(gè)方面。(1)供試品和對照品的接受、貼標(biāo)簽、儲(chǔ)存、處理、配制方法以及取樣等；(2)動(dòng)物房準(zhǔn)備和動(dòng)物的飼養(yǎng)管理；(3)設(shè)施和設(shè)備的維護(hù)、修理；(4)動(dòng)物的轉(zhuǎn)移、飼養(yǎng)、安置、標(biāo)記、編號等；(5)動(dòng)物的一般狀況觀察；(6)各種檢查、測試等操作；(7)瀕死或者已死動(dòng)物的檢查處理；(8)動(dòng)物的尸檢以及組織病理學(xué)檢查；(9)實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的收集和編號；(10)數(shù)據(jù)處理、儲(chǔ)存和檢索；(11)研究單位、安全性研究機(jī)構(gòu)、質(zhì)量保證部門和專題負(fù)責(zé)人的職責(zé)；(12)工作人員的健康檢查制度；（13）安全性研究機(jī)構(gòu)認(rèn)為需要制定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的其他工作。在GLP規(guī)范下進(jìn)行中藥毒理學(xué)研究，就要將硬、軟件建設(shè)工作以SOP的形式體現(xiàn)在上述各方面。資料來源：中國中醫(yī)藥報(bào)