《中國生物制品規(guī)程》 費休（K.Fischer）氏水分測定法

1　試劑

1.1　無水吡啶

取吡啶200ml，置干燥的蒸餾瓶中，加苯40ml，加熱蒸餾，收集114～116℃蒸餾出的吡啶，含水量應在0.1%以下。

1.2　無水甲醇

取甲醇1000ml，于干燥蒸餾瓶中，加金屬鎂約15g與二氯化汞0.4g（或碘0.5g）回流2～4小時，然后蒸餾（蒸餾儀器均需干燥），收集64～65℃蒸餾出的甲醇，含水量應在0.05%以下。

1.3　二氧化硫

工業(yè)用，如無二氧化硫可用硫酸及亞硫酸鈉配制。

Na2SO3+H2SO4→Na2SO4+H2SO3

H2SO3→H2O+SO2

按此反應根據(jù)SO2之需要量計算亞硫酸鈉及硫酸之用量，將亞硫酸鈉置于瓶中，加少量水，緩緩加入硫酸，將生成之二氧化硫通過濃硫酸洗氣瓶，再通入費休氏試劑瓶中。

1.4　費休氏試劑

取干燥的1000ml玻璃容器，加入碘42.33g與無水吡啶133.3ml，加塞，振搖至碘全部溶解后，加無水甲醇333.3ml，稱定重量，將此瓶置冰浴中，用密閉裝置導入經(jīng)濃硫酸洗氣瓶脫水的二氧化硫直至重量增加32g為止，密封避光保存。

1.5　標準水的制備與標化

1.5.1　制備

于干燥無水的50ml容量瓶中，精密稱取0.4g左右雙蒸水，用無水甲醇稀釋至刻度，密封保存。

1.5.2　標化

精密量取標準水1ml與制備標準水用的無水甲醇5ml分別置于干燥帶塞的玻瓶中，用費休氏試劑滴定至溶液呈棕黃色。

1.5.3　計算

稱取水重為Amg。

1ml標準水所需費休氏試劑為Bml。

5ml無水甲醇所需費休氏試劑為Cml。

每ml費休氏試劑相當于水的mg數(shù)為N=A/50　/　B-C/5

1ml標準水之含水量（mg）=N×B

2　操作

2.1　精密稱取干燥制品0.1～0.5g于干燥帶塞的玻瓶中，加無水甲醇5ml（按取樣量情況可酌情減少甲醇加量），不斷振搖，用費休氏試劑滴定至棕黃色，經(jīng)振搖1分鐘不退色，即為終點。同時取無水甲醇5ml作空白試驗。

2.2　費休氏試劑標化

精密量取標準水1ml于干燥帶塞的玻瓶中，用費休氏試劑滴定至終點。

1ml標準水含水量（mg）

費休氏試劑效價N=　────────────

費休氏試劑滴定數(shù)

3　計算

（樣品滴定數(shù)-空白滴定數(shù)）×N1

樣品水分含量%（g/g）=　────────────────×──

樣品重量　10

附注

1．配制試劑及測定樣品用的全部儀器均應干燥至無水。

2．布氏菌病活菌苗及鼠疫活菌苗等制品能在費休氏試劑中溶解，可不用加無水甲醇提取。

3．空氣中濕度大，對水分測定有影響，取樣時應備有防濕裝置。相對濕度應30%以下。

4．有條件可采用卡氏水分測定儀測定。

5．如樣品中含有干擾物質(zhì)，可采用五氧化二磷真空低溫干燥法測定。

5.1　試劑

五氧化二磷（工業(yè)用）。

5.2　操作

取制品0.2～1.0g置于已干燥至恒重的稱量瓶中，加蓋，精確稱定重量（稱量瓶中樣品厚度應在5mm以下），放入五氧化二磷干燥器中，打開瓶蓋，于60℃將干燥器抽真空至133Pa以下，干燥至恒重。干燥完畢應緩慢通入經(jīng)濃硫酸脫水的干燥空氣。

5．3　計算

樣品水分含量%（g/g）=干燥失重/樣品重量×100