水仙提取物能誘導(dǎo)骨髓瘤細(xì)胞凋亡

為了尋找治療多發(fā)性骨髓瘤更有效、更安全的藥物，中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院日前進(jìn)行的一項(xiàng)國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目，以人類多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系A(chǔ)RH-77細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)材料，證實(shí)水仙提取物能抑制ARH-77細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)其凋亡。

腫瘤及許多人類疾病都是細(xì)胞周期性疾病。細(xì)胞周期事件的調(diào)和主要發(fā)生在G1/S和G2/M的轉(zhuǎn)換期。植物類抗腫瘤藥物的篩選和有效成分的分離是當(dāng)前新藥研發(fā)的重要策略之一。實(shí)踐證明多種植物生物堿具有良好的抗腫瘤作用。臨床使用的主要有：長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿、喜樹堿及其衍生物、三尖杉酯堿、高三尖杉酯堿、苦參堿、氧化苦參堿等。

水仙屬石蒜科植物。到目前為止，人們已在石蒜科中發(fā)現(xiàn)了約500種結(jié)構(gòu)各異、生物學(xué)功能不同的生物堿。石蒜治療腫瘤的報(bào)道最早出現(xiàn)在公元前4世紀(jì)，石蒜堿具有抗白血病活性，氧化石蒜堿對(duì)艾氏腹水癌和肝癌腹水型小鼠的壽命延長(zhǎng)率為121％～192％，偽石蒜堿能延長(zhǎng)Rauscher白血病脾腫大小鼠的壽命。在石蒜科植物水仙中同樣富含多種具有抗腫瘤作用的生物堿。

在實(shí)驗(yàn)中，研究人員采用四甲基偶氮唑藍(lán)比色(MTT)法檢測(cè)水仙提取物(1.25、2.5、5、10、20微克/毫升)作用ARH-77細(xì)胞3天后細(xì)胞存活率的變化；采用熒光染色法觀察水仙提取物（10微克/毫升）作用3天對(duì)ARH-77細(xì)胞凋亡的影響，以流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期時(shí)相變化和檢測(cè)細(xì)胞凋亡率；以核仁組織區(qū)(NOR)相關(guān)嗜銀蛋白(AgNOR)染色法檢測(cè)細(xì)胞NOR的改變；以透射電鏡觀察細(xì)胞亞微結(jié)構(gòu)變化。結(jié)果顯示，水仙提取物能明顯抑制ARH-77細(xì)胞增殖，降低細(xì)胞存活率(P<0.01)，其半數(shù)抑制濃度（IC50）為4.8微克/毫升，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡(P<0.05)，阻滯細(xì)胞周期于G2/M期(P<0.01)，降低AgNOR的數(shù)目(P<0.01)和促進(jìn)AgNOR的融合(P<0.01)，引起細(xì)胞亞微結(jié)構(gòu)改變。

研究人員認(rèn)為，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，水仙提取物能顯著抑制腫瘤細(xì)胞增殖，降低腫瘤細(xì)胞的存活率，阻滯細(xì)胞周期于G2/M期；細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察表明水仙提取物能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的發(fā)生。這預(yù)示著水仙提取物參與了與細(xì)胞內(nèi)凋亡、周期相關(guān)的信號(hào)傳導(dǎo)通路的調(diào)控。核仁組織區(qū)相關(guān)嗜銀蛋白(AgNOR)是一組與核糖體RNA(rRNA)轉(zhuǎn)錄有關(guān)的酸性蛋白，可能是RNA聚合酶I的亞單位或rD鄄NA轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)蛋白，也可能是一種酸性的磷酸化蛋白C23(核仁素)和B23蛋白。只有當(dāng)rRNA基因轉(zhuǎn)錄活性達(dá)到一定閾值，NOR才能被銀染色，否則不能被銀染色。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)經(jīng)水仙提取物作用后的AgNOR顆粒均數(shù)明顯減少，類型從彌散型向聚集型轉(zhuǎn)變，這說明水仙提取物作用后，有效地抑制了細(xì)胞內(nèi)rRNA基因轉(zhuǎn)錄活性，從而影響細(xì)胞的增殖能力。總之，水仙提取物能顯著抑制腫瘤細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，在多發(fā)性骨髓瘤治療中具有較好的應(yīng)用前景。