《免疫學和免疫學檢驗》 一、IL-1的檢測

IL-1有兩種分子形式，即IL-1α和IL-2β，它們的生物學活性基本相同，均可采用生物學檢測方法進行檢測，若要區(qū)分IL-1α和IL-2β需用免疫學檢測法。

（一）細胞增殖法

1．淋巴細胞增殖法IL-1具有淋巴細胞活化因子的活性，可以協(xié)同促有絲分裂原刺激T細胞或胸腺細胞發(fā)生有絲分裂，同時IL-1可以刺激T細胞產(chǎn)生IL-2或其它T細胞生長因子，并使之表達相應(yīng)的受體。因此用細胞增殖法檢測IL-1可有直接增殖法和間接增殖法兩種。

（1）直接增殖法：IL-1在促有絲分裂原存在的情況下，能夠促使胸腺淋巴細胞和某些體外建株的T細胞克隆生長，因此測定這些細胞的增殖情況即可反映IL-1的活性。小鼠胸腺細胞測定法操作簡單，比較常用，缺點是缺少特異性，因為IL-2亦可協(xié)同促有絲分裂原刺激胸腺細胞增殖。D10G4.1（一種小鼠TH細胞克隆）測定法較胸腺細胞測定法的敏感性高，且D10G4.1對IL-2不敏感，因此特異性增強，缺點是需要長期飼養(yǎng)細胞株，該實驗以3H-TdR摻入法或MTT法檢測細胞增殖情況。通常IL-1濃度越高，細胞轉(zhuǎn)化能力越強，IL-1濃度低于0.05ng/ml時，細胞轉(zhuǎn)化能力接近促有絲分裂原單獨刺激的程度。

（2）間接增殖法：某些品系小鼠的T細胞系只有在IL-1存在的條件下才能產(chǎn)生IL-2，并且IL-2的產(chǎn)生量與IL-1的濃度成直線關(guān)系。因此可以利用IL-2依賴細胞株（如CTLL2）測定IL-2，藉以間接測定IL-1的含量。

2．成纖維細胞增殖法IL-1能刺激成纖維細胞的增殖，故可利用來源于新生兒包皮或傳代的人皮膚成纖維細胞（如CRL1445）測定IL-1。國內(nèi)常用小鼠成纖維細胞瘤L929細胞株。

檢測原則是將生長成單層的L929細胞用胰酶消化后，配成適當濃度的細胞懸液，繼將不同稀釋度的待測樣本與L929細胞懸液分加入96孔培養(yǎng)液中。一式三份，并設(shè)置陰性對照，放入37℃、5％CO2的溫箱中溫育72h，在第16h時加入適量3H-TdR，繼續(xù)溫育，結(jié)束后離心棄去培養(yǎng)上清，加入適量胰酶消化數(shù)分鐘后，收集細胞測定cpm值或吸光度值。

（二）其他方法

1．骨和較骨組織測定法利用IL-1可誘導膠原酶釋放，破壞軟骨組織的特性，用分光光度計測定軟骨硫酸鹽釋放量，即可間接椎知IL-1量。又如IL-1能影響骨質(zhì)吸收，應(yīng)用放射性45Ca通過小鼠頭頂骨系統(tǒng)吸收可測定IL-1活性，為骨質(zhì)吸收釋放法。

2．PGE2測定法IL-1作用于下丘腦，誘導腦細胞合成前列腺素E2（PGE2），發(fā)揮致熱原作用；還能誘導原代培養(yǎng)或建株傳代的成纖維細胞產(chǎn)生PGE2，故可用放免疫技術(shù)測定PGE2藉以間接測定IL-1。

3．放射免疫測定法本法利用受檢IL-1樣品與碘標記IL-1競爭性結(jié)合Sepharose4B中抗IL-1抗體結(jié)合位點的原理而設(shè)計。該法敏感性較高，且可排除樣品中其它干擾因素的影響，其特點是可以區(qū)分IL-1α和IL-1β。

4．體內(nèi)測定法IL-1在體內(nèi)可誘導發(fā)熱、引起急性期蛋白合成及影響血中鐵和鋅水平。實驗室多利用IL-1的致熱原作用加以檢測。在給動物靜脈注射IL-1前后，以體溫的升高幅度表示IL-1的活性，或定期測定血清中某些急性期蛋白的含量，如血清淀粉樣蛋白A，血清淀粉樣蛋白P等。

總之，由于IL-1的生物學活性比較廣泛，其檢測方法亦多種多樣，但每種方法均有其缺點，往往需要結(jié)合使用。T細胞增殖法簡便、易行且敏感，但樣品中若混有IL-2，則可協(xié)同促有絲分裂原刺激T細胞增殖，從而干擾IL-1的測定。血清中的TNF同樣可以刺激成纖維細胞的增殖，也可用成纖維細胞測定法，但特異性較差。放免法可排除其它因子的干擾，但此法僅測得IL-1的抗原性，不能完全代表其生物學活性。