《基因診斷與性傳播疾病》 第二節(jié)　支原體性感染癥

生殖器支原體（Mycoplasmasemtalium）感染是近年新明確的一種性接觸傳播疾病。

一、病原學(xué)

支原體（Mycoplasmal）是目前所能發(fā)現(xiàn)的能在無生命培基中生長繁殖的最小的微生物。它廣泛分布于自然界，有80余種，與人類有關(guān)的支原體有肺炎支原體（M-pneumonie，Mp）、人型支原體（M.humenis，MH）、解脲支原體（Ureaplasma urealyticum，UU）和生殖器支原體（M.genitalium，MG），前者引起肺炎，后三者引起泌尿生殖道感染。支原體體形多樣，基本為球形，亦可呈球桿狀或絲狀，其菌落呈針尖大小，故又稱之為微小支原體。支原體特點(diǎn)是無細(xì)胞壁及前體，細(xì)胞器極少。DNA的G+C含量低，菌體內(nèi)具有非常小的染色體組，其分子量約為45×108，菌體細(xì)胞大小約為0.2-0.3μm，很少超過1.0μm。由三層蛋白質(zhì)和脂質(zhì)組成的膜樣結(jié)構(gòu)以及一層類似毛發(fā)結(jié)構(gòu)組成。支原體由二分裂繁殖，形態(tài)多樣。支原體用普通染色法不易著色，用姬姆薩染色很淺，革蘭染色為陰性。支原體可在雞胚絨毛尿囊膜上或細(xì)胞培養(yǎng)中生長。用培養(yǎng)基培養(yǎng)。營養(yǎng)要求比細(xì)菌高。由于它沒有細(xì)胞壁，因此對影響細(xì)胞壁合成的抗生素，如青霉素等不敏感，但紅霉素、四環(huán)素、卡那霉素、鏈霉素、氯霉素等作用于核蛋白體的抗生素，可抑制或影響支原體的蛋白質(zhì)合成，有殺傷支原體作用，支原體對熱抵抗力差，通常55℃經(jīng)15分鐘處理可使之滅活。石碳酸，來蘇兒易將其殺死。在培養(yǎng)基中置入脲素并以硫酸錳作指示劑極易與其他支原體作出鑒別。

二、流行病學(xué)

由于診斷條件所限和命名上的問題。國內(nèi)尚無系統(tǒng)的人群調(diào)查資料，支原體可存在于健康攜帶者，而在性亂者、同性戀、妓女、淋病患者中檢出率較高，我國報(bào)道7個地區(qū)健康人攜帶率為解脲支原體（UU）占10.59%，人型支原體（MH）占5.34%。性亂者UU的檢出率為71.7%，MH為19.57%。調(diào)查表明，性伴數(shù)越多，性活躍指數(shù)越大，UU和MH感染率越高。

三、傳播途徑

成人主要通過性接觸傳播，新生兒則由母親生殖道分娩時感染。成人男性的感染部位在尿道粘膜，女性感染部位在宮頸。新生兒主要引起結(jié)膜炎和肺炎。

四、發(fā)病機(jī)理與免疫

支原體只能粘附在呼吸道或泌尿生殖道的上皮細(xì)胞表面的受體上，而不進(jìn)入組織和血液。支原體引起細(xì)胞損害的原因?yàn)椋赫掣接谒拗骷?xì)胞表面的支原體從細(xì)胞吸收營養(yǎng)，從細(xì)胞膜獲得脂質(zhì)和膽固醇，引起細(xì)胞損傷；支原體代謝產(chǎn)生的有毒物質(zhì)，如溶神經(jīng)支原體能產(chǎn)生神經(jīng)毒素，引起細(xì)胞膜損傷；脲原體含有尿素酶，可以水解尿素產(chǎn)生大量氨，對細(xì)胞有毒害作用。支原體除可以粘附于細(xì)胞、巨噬細(xì)胞表面外，還可以粘附于精子表面，從而阻止精子運(yùn)動，其產(chǎn)生神經(jīng)氨酸酶樣物質(zhì)可干擾精子與卵子的結(jié)合。這就是支原體感染引起不育不孕的原因之一。

在動物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，小鼠腹腔巨噬細(xì)胞可以殺滅支原體，而中性粒細(xì)胞的作用不大。在體外，IgG1和IgG2抗體有調(diào)理作用?？杉訌?qiáng)巨噬細(xì)胞對支原體的殺傷作用。

五、臨床表現(xiàn)

潛伏期為1-3周，典型的急性期癥狀與其他非淋病性生殖泌尿系統(tǒng)感染相似，表現(xiàn)為尿道刺痛，不同程度的尿急及尿頻、排尿刺痛，特別是當(dāng)尿液較為濃縮的時候明顯。尿道口輕度紅腫，分泌物稀薄，量少，為漿液性或膿性，多需用力擠壓尿道才見分泌物溢出，常于晨起尿道口有少量粘液性分泌物或僅有痂膜封口，或見污穢褲襠。約有三分一的病人可無任何自覺癥狀。只是在例行檢查時才被發(fā)現(xiàn)。50%病人初診被忽略或誤診，約有10%-20%的患者同時有淋球菌雙重感染。

亞急性期常合并前列腺感染，患者常出現(xiàn)會陰部脹痛、腰酸、雙股內(nèi)側(cè)不適感或在做提肛動作時有自會陰向股內(nèi)側(cè)發(fā)散的刺痛感。肛診時前列腺縱溝不明顯或表面類似核桃殼凹凸不平，少數(shù)病例B型超聲波診斷可證實(shí)不同程度的增大。合并副睪炎者不多見。

女性患者多見以子宮頸為中心擴(kuò)散的生殖系炎癥。多數(shù)無明顯自覺癥狀，少數(shù)重癥病人有陰道墜感，當(dāng)感染擴(kuò)及尿道時，尿頻、尿急是引起病人注意的主要癥狀。感染局限在子宮頸，表現(xiàn)為白帶增多、混濁、子宮頸水腫、充血或表面糜爛。感染擴(kuò)及尿道表現(xiàn)為尿道口潮紅、充血、擠壓尿道可有少量分泌物外溢，但很少有壓痛出現(xiàn)。

支原體感染常見的合并癥為輸卵管炎，少數(shù)患者可出現(xiàn)子宮內(nèi)膜炎及盆腔炎。

六、診斷及鑒別診斷

（一）臨床診斷

有不潔性交史，有尿道、陰道分泌物及排尿灼痛表現(xiàn)者而又排除其他病原體感染的可能性，取尿道或?qū)m頸分泌物涂片，在1000倍顯微鏡下可見多形核白細(xì)胞≥5個，可作初步診斷。

（二）實(shí)驗(yàn)診斷

支原體感染的實(shí)驗(yàn)室診斷主要是支原體的培養(yǎng)和血清學(xué)鑒定，目前主要采用基因診斷。

1．支原體培養(yǎng)：

a．采集標(biāo)本，一般為泌尿生殖試子或刷片，少數(shù)取前列腺液，精液、關(guān)節(jié)液，或取輸卵管，直腸活檢物，近年來用初段尿標(biāo)本離心物，以取代尿道拭子。拭子取材時，將拭子插入男性尿道2-4cm，用力擦取。該方法容易造成尿道損傷及繼發(fā)感染。用時須慎重。女性則需先清潔宮頸鱗狀與柱狀上皮結(jié)合部，用細(xì)胞刷收集宮頸標(biāo)本，能增加感染細(xì)胞的數(shù)量，較棉拭子敏感性高。

b．常用培養(yǎng)基為牛心浸液或蛋白胨，并含1%新鮮酵母浸液，10-20%動物血清及0.5%氯化鈉，還可加葡萄糖和精氨酸以促進(jìn)MH和MG生長，加入尿素以供UU代謝，適量加青霉素抑制雜菌。

2．血清學(xué)鑒定法：最常用的是瓊脂擴(kuò)散法，即將支原體接種到瓊脂皿上。然后再用浸過適量血清的濾紙放到瓊脂表面，觀察哪一種能抑制支原體生長。也可用瓊脂表面的菌落作熒光抗體染色法，用落射熒光顯微鏡觀察，此法的優(yōu)點(diǎn)是可以利用最初生長在瓊脂表面上的菌落而不必將支原體傳代。

血清學(xué)診斷試驗(yàn)：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）敏感性高：微量免疫熒光法（MIF）具有快速特點(diǎn)。

3． 基因診斷：利用DNA探針對支原體診斷其敏感性稍差，但特異性高，用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR），敏感性、特異性均高。具體檢測方面如下：

（1）標(biāo)本處理

1．取材部位為子宮頸管，男性為尿道，將滅菌白金耳深入宮頸管或尿道1cm左右，轉(zhuǎn)動數(shù)圈，停留約30s，取出后置標(biāo)本緩沖液中。

2．解脲脲原體DNA提取：

將宮頸管內(nèi)或尿道內(nèi)刮取物置含0.5%NP-40、0.5%Tween20，1%SDS和2mg/ml蛋白酶K的TES緩沖液（50mmol/l Tris-HCl，50mmol/L NaCl，100mmol/ L EDTA，pH 8.0），置37℃裂解60 min，沸水5min，酚，氯仿抽提DNA乙醇沉淀，沉淀物溶于20μl TE緩沖液(100mmol/L Tris-HCl，1mmol/L EDTA，pH 8.0)。

（2）引物設(shè)計(jì)

引物來源于解脲脲原體，脲酶基因序列：

UU1：CAGATACATTAAACGAAGCAGG（1613-1635）

UU2：GTGGTGACATACCATTAAC（1837-1819）

（3）PCR擴(kuò)增

傳統(tǒng)的方法為的反應(yīng)體積為100μl，含5x反應(yīng)緩沖液20μl和FD-DNA聚合酶2μ、4種dNTP各200μmol/L以及引物對各25pmol/L。上述成分預(yù)先一次性分裝于0.5ml離心管，-20℃?zhèn)溆?。臨用加模板DNa 2μl，短暫離心，加100μl礦物油覆蓋?，F(xiàn)在試劑已商品化，反應(yīng)體積為25μl，單管已分裝好，只要加入模板DNA即可。置DNA擴(kuò)增儀進(jìn)行40次循環(huán)擴(kuò)增。每次循環(huán)包括90℃變性45s(第一次循環(huán)變性2min)，55℃退火30s和72℃延伸40s（最后一次循環(huán)72℃，延伸5min）三個步驟。每次擴(kuò)增均應(yīng)作陰陽性對照。

（4）擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測

1．1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測：取10u lPCR擴(kuò)增物作1.5%瓊脂糖凝膠電泳、0.5μg/ml溴化乙錠染色，以PGEM-3Zf（+）DNA-Hae Ⅲ為分子量標(biāo)準(zhǔn)，置紫外透射儀觀察結(jié)果。

2. 治療：治療基本同衣原體治療。強(qiáng)力霉素100mg口服，每日2次，連服7-14天或阿齊霉素1g，單劑量口服，半衰期長達(dá)60小時，一次口服，可維持有效濃度5天；氟嗪酸0.2，口服，每日2次，連服7-14天。