《基因診斷與性傳播疾病》 二、核酸探針的標(biāo)記和檢測(cè)

分子雜交是核酸鏈以堿基配對(duì)規(guī)則的一種結(jié)合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子雜交這一特性來(lái)對(duì)特定核酸序列進(jìn)行檢測(cè)，必須將雜交鏈中的一條用某種可以檢測(cè)的進(jìn)行標(biāo)記，這條鏈就稱(chēng)為核酸探針。因此，核酸探針的制備是分子雜交技術(shù)的關(guān)鍵。放射性同位素標(biāo)記是最早采用的也是目前最常用的核酸探針標(biāo)記方法。常用的放射性同位素有32P和35S。32P因其能量高，信號(hào)強(qiáng)，所以最常用。放射性同位素標(biāo)記探針雖然敏感度高，但卻存在輻射危害和半衰期限制（32P半衰期為14.3天，35S半衰期為87.1天，125I半衰期為60天），3H的半衰期長(zhǎng)達(dá)12.3年，但它所釋放β射線的能量太低，只能用于組織原位雜交。由于同位素標(biāo)記的探針在使用過(guò)程中存在著上述缺點(diǎn)，近年來(lái)，人們?cè)趯ふ曳欠派湫詷?biāo)記物方面取得了很大進(jìn)展。國(guó)內(nèi)已具備生物素類(lèi)標(biāo)記物的生產(chǎn)能力，并有相應(yīng)試劑出售。目前非放射性標(biāo)記物有下述幾類(lèi)：金屬如Hg、熒光物質(zhì)如F2TC、半抗原如地高辛、生物素、酶類(lèi)如辣根過(guò)氧化物酶（HRP）、半乳糖苷酶或堿性磷酸酶（AKP）等，不同的標(biāo)記物，所標(biāo)記探針的方法及檢測(cè)方法也各異。

核酸探針的常用酶促標(biāo)記技術(shù)有：缺口平移；DNA快速末端標(biāo)記；用T4多核苷酸酶標(biāo)記DNa5'末端，隨引物延伸；聚合酶鏈反應(yīng)。

核酸探針的非放射性標(biāo)記技術(shù)有：光促生物素標(biāo)記核酸、酶促生物素標(biāo)記核酸、寡核苷酸的生物素末端標(biāo)記、酶標(biāo)DNA、酶標(biāo)寡核苷酸、DNA半抗原標(biāo)記。