《動脈粥樣硬化》 一、高密度脂蛋白膽固醇測定

血漿中脂蛋白有多種，測定其各自的含量對于了解機(jī)體正常及疾病過程中脂質(zhì)代謝狀況有重要的臨床意義。HDL是一組不均一的脂蛋白顆粒，其膽固醇含量占血漿總膽固醇量的25%～35%。由于血漿中所有脂蛋白均含有膽固醇，因此，只有先分離出HDL才能對其進(jìn)行定量。分離HDL的方法中，沉淀法是目前臨床使用最多的方法，操作簡便快速。沉淀法原理是利用多聚陰離子和二價(jià)陽離子共同作用于脂蛋白，并選擇性地使含ApoB的VLDL和LDL脂蛋白沉淀，再測定含HDL的上清液膽固醇，即高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）。定量HDL全量是很困難的，因?yàn)樗堑鞍踪|(zhì)和脂類的混合物，故以測定HDL中所含膽固醇含量作為HDL定量依據(jù)。

要測定血清中HDL-C，就必需先沉淀HDL以外的脂蛋白，即VLDL和LDL。使血清中VLDL和LDL沉淀的試劑很多，常用的有四種：①肝素-錳沉淀法，該法操作簡便易行，一旦遇上血脂升高的標(biāo)本，有沉淀不完全的差異；②硫酸葡聚糖-鎂法，該法也簡單易行，試劑較貴而難買到；③聚乙二醇法，雖然簡便易行，若遇高脂血癥標(biāo)本，其重復(fù)性差；④磷鉬鎢酸-鎂法，操作簡便易行，結(jié)果準(zhǔn)確，是目前臨床推薦使用的方法；⑤另有一種不沉淀VLDL和LDL也可直接測定HDL的方法，稱之為直接測定法。其原理是，先用一種封阻血清VLDL和LDL，而不封阻HDL，當(dāng)測膽固醇的酶試劑加入后，酶可作用于HDL的膽固醇進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，測出其濃度，但酶試劑就無法使已被試劑封阻的VLDL和LDL的膽固醇進(jìn)行反應(yīng)，這種直接法操作更為簡便，無需離心等繁雜步驟，便于在自動生化分析儀上進(jìn)行HDL-C測定，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，缺點(diǎn)是成本過高。下面僅介紹目前推薦使用的方法。

（一）原理

磷鎢酸-鎂（PTA-Mg2+）沉淀血清中含ApoB的脂蛋白（VLDL、LDL），上清液中只含HDL，用酶法測定上清液中膽固醇，即HDL-C。

生成的醌亞胺與HDL中的CE及FC成正比。

2．試劑組成

（1）沉淀劑磷鎢酸鈉4g溶于50ml雙蒸水中，加入1mol/l NaoH16ml，充分?jǐn)嚢韬?，再加雙水至100ml，調(diào)pH到7.6。再取40ml此溶液，加2mol/l MgCl210ml，混勻，再加水至100ml，此為應(yīng)用液。

（2）膽固醇酶法測定試劑（同第十五章）

（3）膽固醇標(biāo)準(zhǔn)參考液（同第十五章）

3．操作

（1）空腹12h，抽取靜脈血，不抗凝，分離血清備測。于24h內(nèi)操作完畢。

（2）其他操作同前。

4．注意事項(xiàng)

（1）室溫以15～20℃為宜，＜15℃或＞30℃時(shí)應(yīng)增加或減少靜置時(shí)間，離心轉(zhuǎn)速要恒定一致。

（2）離心沉淀后，要立即吸出上清進(jìn)行測定，否則結(jié)果偏離不準(zhǔn)。

（3）若血清TC超過500mg/dl時(shí)，上清液會出現(xiàn)混濁，表明有部分膽蛋白漂浮在上清液中未沉淀完全，此時(shí)將血清稀釋重新沉淀，其所測值乘以稀釋倍數(shù)。

（二）血清HDL-C選擇遮敝直接測定法。

1．原理

含反應(yīng)抑制劑的陰離子表面活性劑加入血清中后，與CM、VLDL和LDL緊密結(jié)合，少量與HDL結(jié)合。爾后，再加入反應(yīng)促進(jìn)劑的聚陰離子表面活性劑后，HDL溶化并釋放出膽固醇，與膽固醇測定試劑進(jìn)行反應(yīng)，達(dá)到僅測出高密度脂蛋白-膽固醇（HDL-C）的目的，其反應(yīng)全過程為：

2．試劑（第一化學(xué)）

RⅠ：前處理液（第一反應(yīng)液）

RⅡ：第二反應(yīng)液（可溶性表面活性劑）及顯色液

HDL-C參考血清

3．操作

按雙試劑雙波長法在CL-7200型全自動生化分析儀進(jìn)行檢測，有關(guān)參數(shù)如表16-1所示。

表16-1 HDL-C檢測參數(shù)

標(biāo)本濃度按△A=A2-A1的吸光度計(jì)算

4．特點(diǎn)

（1）直接測定，無需預(yù)處理。

（2）操作簡便，減少影響準(zhǔn)確性的因素。

（3）標(biāo)本及試劑用量少，準(zhǔn)確性高。

（4）抗干擾能力強(qiáng)，適合于自動化分析。

（5）該法CV為5%以下，回收率90%～110%。線性范圍（0～5.85mmol/L）。

5．注意事項(xiàng)

（1）待測血清標(biāo)本于當(dāng)日測試，2～8℃保存，一周內(nèi)測定，-20℃長期保存，對測定結(jié)果無影響。

（2）干擾物維生素C500mg/L、膽紅素200mg/L、Hb5.0g/L以下均不影響測定結(jié)果。