《動(dòng)脈粥樣硬化》 二、血清低密度脂蛋白測(cè)定

LDL是一組不均一的脂蛋白顆粒，其膽固醇含量約占總膽固醇的45%～50%。

測(cè)定血漿中LDL，首先同樣要分離LDL，其分離方法有超速離心法、聚陰離子沉淀法、色譜法、電泳法及計(jì)算法等。以聚陰離子沉淀法簡(jiǎn)便易于操作，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。由于直接測(cè)定LDL有一定的困難，因?yàn)樗堑鞍踪|(zhì)脂類(lèi)組成的顆狀結(jié)構(gòu)，膽固醇是其較為衡定的因素，因此采用測(cè)定LDL中所含的膽固醇的濃度作為L(zhǎng)DL定量的依據(jù)。

另外，還可以通過(guò)用Friedwal公式計(jì)算，主要是利用血清TC、TG及HDL-C濃度測(cè)定結(jié)果，即LDL-C=TC-HDL-C-（1/5）TG。對(duì)脂代謝異常的高脂血癥，不能按此方法計(jì)算結(jié)果。

（一）聚乙烯硫酸鹽（PVS）法

1．原理

生成的醌亞胺與上清液的TC含量成正比。

2．試劑組成

（1）沉淀劑：聚乙烯硫酸鉀鹽0.7g/L、聚乙二醇獨(dú)甲醚170g/L、乙二胺四乙酸5mmol/L，混勻，4～21℃避光可保存一年。

（2）酶法膽固醇測(cè)定試劑（同第15章）。

（3）膽固醇標(biāo)準(zhǔn)液：2.58mmol/L。

3．操作

（1）空腹12h，采靜脈血，3h內(nèi)分離完成血清以免脂蛋白之間相互交換和防止LDL降解。-70℃可以保存數(shù)月之久。

（2）取200μl血清置于含有沉淀劑100μl試管中充分混勻，室溫放置15min,3000r/min離心，留上清測(cè)定膽固醇。

（3）按下表進(jìn)行操作：

空白管測(cè)定管標(biāo)準(zhǔn)管上清液（μl）30定值血清（μl）30水（μl）30膽固醇酶試劑（μl）2.02.02.0

混勻，37℃6min，以空白管調(diào)零（500nm），讀取光密度。

（4）計(jì)算

血清LDL-C=TC-上清液膽固醇

（5）注意事項(xiàng)

標(biāo)本沉淀過(guò)程嚴(yán)格按要求進(jìn)行。吸取上清液時(shí)，注意輕吸，別攪動(dòng)沉淀。

PVS法能將Lp（α）完全沉淀，一般情況下，正常人含量極少，一旦高脂血癥、Lp（α）增高時(shí)，其測(cè)定值LDL-C應(yīng)為L(zhǎng)DL-C和Lp（α）-C之和。

（二）血清LDL-C直接測(cè)定法

1．原理

含反應(yīng)活性劑的試劑Ⅰ加入血清后，與HDL、VLDL和CM反應(yīng)，使其膽固醇水解并與酶反應(yīng)生成無(wú)色產(chǎn)物溶于介質(zhì)中。再加入含溶解LDL的活性劑Ⅱ試劑，使LDL水解并與其中的膽固醇試劑進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)生成紅色化合物，定量血清中LDL-C。

以△A=A2-A1進(jìn)行運(yùn)算，測(cè)出LDL-C的含量

2．試劑（第一化學(xué)）

R1：去垢劑1、COD、POD、4-AAP。

R2：去垢劑2、DSBmT。

3．操作

按CL-7200型或其他型號(hào)全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)，有關(guān)參數(shù)如表16-2所示。

表16-2　LDL-C檢測(cè)參數(shù)

名稱(chēng)參數(shù)分析方式終點(diǎn)法標(biāo)本用量（μl）[3]R1體積（μl）[300]R2體積（μl）[100]第一試劑時(shí)間5min第二試劑時(shí)間5min波長(zhǎng)（nm）[560][600]

4．特點(diǎn)

（1）直接測(cè)定，無(wú)需預(yù)先處理。

（2）操作簡(jiǎn)便，減少影響準(zhǔn)確性的因素。

（3）標(biāo)本及試劑用量少，準(zhǔn)確性高。

（4）抗干擾能力強(qiáng)，適合于自動(dòng)化分析。

（5）該法CV為5%以下，回收率90%～110%，線性范圍0～88mmol/L。

5．注意事項(xiàng)

待測(cè)血清標(biāo)本于當(dāng)日測(cè)試，2～8℃一周內(nèi)保存，-20℃以下長(zhǎng)期保存，結(jié)果均不受影響。