《動(dòng)脈粥樣硬化》 二、酶法（CEH、COD-POD法）

首先將血清中膽固醇酯在膽固醇酯酶（CEH）水解為游離膽固醇和脂肪酸，膽固醇在膽固醇氧化酶（COD）作用下，生成△4-膽甾烯酮和H2O2，再H2O2經(jīng)過(guò)氧化物酶（POD）作用在4-氨基安替比林（4-AA-P）及N-乙基-N-（3-磺基醋酸）-3甲氧基苯胺（N-ethyl-N-(3-sulfopropyl)-manisidine,ESPAS）參與下，生成紅色醌亞胺色素。

H2O2+ESPAS+4-氨基安替比林→紅色醌亞胺色素

（一）手工測(cè)定法

1．試劑組成

代號(hào)種類(lèi)濃度組成貯2～8℃有效時(shí)間Na2HPO450mmol/LNa2H2PO450mmol/L膽酸鈉3mmol/L4-氨基安替比林0.82mmol/LR1*ESPAS14mmol/L24hCarbowax-60000.17mmol/LCEH33U/LCOD117U/LPOD6700U/LR2標(biāo)準(zhǔn)液5.17mmol/L用異丙醇溶解膽固醇

*混勻，調(diào)pH至6.70±0.10(25℃)，或購(gòu)買(mǎi)試劑盒。酶以活性單位表示。

2．操作

按圖15-2操作。

3．計(jì)算

標(biāo)準(zhǔn)總膽固醇濃度=ESA/EST×5.17(mmol/L)

（二）自動(dòng)化分析儀測(cè)定

以CL-7200型全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)為例。

1．試劑組成

A液：CEH、POD、抗壞血酸氧化酶等。

B液：COD、4-氨基安替比林等。

圖15-2 血清膽固醇測(cè)定（酶法）操作圖

2．上機(jī)參數(shù)

項(xiàng)　目參　數(shù)方　法終點(diǎn)法波　長(zhǎng)雙波長(zhǎng)（540nm，700nm）反應(yīng)溫度37℃試劑A反應(yīng)時(shí)間2～3min試劑B反應(yīng)時(shí)間5～6min樣本用量3μl試劑A用量250μl試劑B用量120μl單位mmol/L

3．操作過(guò)程

4．計(jì)算

以△A=A2-A1，根據(jù)同樣處理之標(biāo)準(zhǔn)或質(zhì)控物計(jì)算，打印結(jié)果。

5．注意事項(xiàng)

（1）試劑與樣本量可根據(jù)分析儀要求按比例改變。

（2）試劑在有效內(nèi)2～8℃避光食保存。

（3）膽固醇含量超過(guò)200mmol/L，需用生理鹽水稀釋再測(cè)。