《中國幽門螺桿菌研究》 2 結(jié)果

2.1 Hp的基本生物學(xué)性狀

2.1.1 光鏡下形態(tài)結(jié)構(gòu) Hp為“S”形、“U”形或弧形桿菌。菌體寬0.3～0.5μm,長1.5～5.0μm。大多大小均勻，形態(tài)典型，革蘭染色陰性。Hp較CJ/CC稍粗，兩端鈍圓。在陳舊培養(yǎng)物中，Hp常變成圓球體，在革蘭染色下呈現(xiàn)大小不一、染色深淺不均，周圍界較模糊的特征。在胃粘膜活檢標(biāo)本直接涂片中，多數(shù)存在于著色較淺的粘液帶中，常呈魚貫狀排列，在Hp密集處，甚少雜菌混雜，在著色的組織液背鏡下，Hp菌全周圍常呈現(xiàn)有微莢膜樣結(jié)構(gòu)。在病理組織切片中可見，Hp多數(shù)存在胃粘膜上皮細(xì)胞表面，特別是在胃小凹。在病理切片中尚可見到在胃粘膜表面有Hp存在的附近部位常有大量中性粒細(xì)胞、漿細(xì)胞等炎癥細(xì)胞的浸潤。在胃的腸腺化生區(qū)域很難找到Hp，但是在十二指腸的胃化生區(qū)域卻能找到Hp。

2.1.2 菌落特征及細(xì)菌動(dòng)力 在微需氧條件下，經(jīng)37°C72h培養(yǎng)，Hp形成較小菌落，直徑＜1mm，呈灰白或灰色，邊緣整齊，隆起的圓形菌落。打開平皿有一股特異的氣味。新鮮的菌落制成濕片在暗視野下可見Hp呈螺旋狀迅速向前的運(yùn)動(dòng)。亦可見翻滾運(yùn)動(dòng)。

2.1.3 生化反應(yīng)特征 Hp的生化反應(yīng)特征見表2。Hp均有氧化酶、觸酶、尿素酶、DNA酶、堿性磷酸酶和亮氨酰酞酶，而馬尿酸鹽試驗(yàn)均陰性，CJ和CC僅有氧化酶和觸酶，而CJ-S131能分解馬尿酸鹽。

2.1.4 Hp對(duì)抗生素的敏感性 25株Hp對(duì)13種抗菌藥物的藥敏性見表3。

表2 Hp、CJ和CC生化反應(yīng)

試驗(yàn)Hp-88065Hp-88073Hp-88082CP-88109Hp-88152CJ-S131CJ-3276CC-3278氧化酶++++++++觸酶++++++++尿素酶+++++－－－DNA酶+++++－－－堿性磷酸酶+++++－－－亮氨酰氨酞酶+++++－－－馬尿酸鹽－－－－－+－－

表3 25株Hp對(duì)13種抗菌藥物的藥敏結(jié)果

抗菌藥物MIC（μg/ml）MIC50MIC90潔霉素0.7812.5紅霉素＜0.050.39TMP＞100＞100先鋒霉素V0.225鏈霉素＜0.050.39四環(huán)素＜050.2慶大霉素0.20.78青霉素G＜0.050.1萬古霉素6.25＞100多粘菌素B6.2550次硝酸鉍3.1225痢特靈＜0.050.2滅滴靈1.56＞100

從表中可知所有被檢的Hp菌株對(duì)紅霉素、鏈霉素、四環(huán)素、慶大霉素、青霉素G及痢特靈敏感，其中特別是四環(huán)素、青霉素G和痢特靈的敏感性尤甚，MIC90分別是0.2,0.1及0.2。MIC50均＜ 0.05。Hp對(duì)TMP、多粘菌素B、萬古菌素及滅滴靈耐藥，大部分菌株的MIC均＞100。

2.1.5 菌種保存 15株Hp菌株，經(jīng)-70°C冰箱保存一年后復(fù)蘇，14株存活，對(duì)存活的14株作直接涂片革蘭染色，油鏡檢查，其中的13株形態(tài)不變，1株成圓球體。我們又對(duì)這13株進(jìn)行了氧化酶、觸酶、尿素酶、DNA酶、堿性磷酸酶試驗(yàn)，13株Hp陽性，這與保存前相同。

2.2 Hp的超微結(jié)構(gòu)

從不同病人胃粘膜上分離得Hp的形態(tài)結(jié)構(gòu)基本一致,呈”S”形彎曲、弧形或稍直，偶見分枝狀。一般表面較光滑，一端或二端（多數(shù)為一端）具有2～6條帶鞘鞭毛，長度稍長于菌體。帶鞘的鞭毛直徑在30mm左右。每一鞭毛基部與菌體細(xì)胞膜上直徑約50mm的圓球狀結(jié)構(gòu)相連。菌體末端鞭毛基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)內(nèi)側(cè)，有一寬達(dá)200mm～400mm的電子密度明顯降低區(qū)域，其基底部無明顯的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)界限。在Hp負(fù)染標(biāo)本中，部分菌株在菌體周圍可見大小均一、排列整齊的上百個(gè)“指”狀突起，似直接為外膜的組成部分，與菌體內(nèi)部結(jié)構(gòu)無明顯直接關(guān)系。在參考菌株中，CJ與CC末端呈圓錐體樣，稍尖，頂端明顯地呈吸盤樣結(jié)構(gòu)。CJ與CC均有單根無鞘端鞭毛從頂端的吸盤樣凹陷的中心伸出。鞭毛根部均未見電子密度明顯降低區(qū)域。

在胃粘膜活檢標(biāo)本的超薄片中可見：一般情況下，胃粘膜上皮與粘液層間不存在細(xì)菌。若出現(xiàn)細(xì)菌，常為大小、形態(tài)較統(tǒng)一的、都呈彎曲樣特征的菌群。多聚居在胃小凹中或上皮細(xì)胞與上皮細(xì)胞連接處，亦常常鑲嵌在微絨毛之間。偶見Hp在局部的胃粘膜上皮上定位似有明顯的方向性。Hp與粘膜上皮的粘附方式有三種：Hp通過鞭毛頂端直接插入或粘附在胃粘膜上皮細(xì)胞表面；Hp菌體懷胃上皮細(xì)胞間保持一定的間距，借無數(shù)的細(xì)絲狀菌毛樣網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)使兩者互相粘附；Hp菌體的部分細(xì)胞壁與胃上皮細(xì)胞的細(xì)胞膜直接相貼粘附，二者間幾無間距。最多見的是第二形式，有時(shí)同一細(xì)菌可同時(shí)出現(xiàn)兩種或以上粘附形式。Hp粘附聚居外的上皮細(xì)胞除微絨毛明顯減少或消失外，多數(shù)情況下很少發(fā)現(xiàn)有明顯的細(xì)胞病理學(xué)變化。胃粘膜上皮表面有Hp粘附的鄰近區(qū)域，往往有炎性細(xì)胞的浸潤和滲出。胃粘膜上皮細(xì)胞中尚可偶見對(duì)Hp的吞噬現(xiàn)象。

2.3 Hp的DNA+Cmol%和菌體脂肪酸組成

2.3.1 Hp的DNAG+C MOL%含量測(cè)得的Hp、CJ/CC DNA G+Cmol%含量見表4

表4 Hp CJ/CC DNA G+C mol%含量

菌種Hp-88065Hp-88073Hp-88082Hp88109Hp88152CJ-S131CJ-3276CC-3278DNA38.335.736.837.537.336.337.936.1G+C mol%

2.3.2 Hp ,CJ/CC菌體脂肪酸的組成 Hp 的脂肪酸組成主要是十九碳環(huán)丙烷酸(19:0cyc)、十八碳酸（18:0）、十八碳烯酸（18:1）和十四碳酸（14:0），CJ/CC的脂肪酸組成主要是十六碳酸（16:0）、十六碳烯酸（16:1）和十八碳烯酸（18:1，表5）。

表5 Hp,CJ/CC菌體脂肪酸組成

菌 種脂肪酸組成（占總%）14:015:016:016:117:018:018:118:219:0cyc19:0Hp-8806518.721.623.250.500.4816.2221.032.2424.203.34Hp-880734.90-2.17--26.2439.7-7.33-Hp-880827.29----25.4722.74-39.24-Hp-881093.680.877.020.63-21.4831.992.1127.31-Hp-81521.230.702.57--29.2723.303.0239.270.64CJ-32761.06-37.4217.62--38.893.83--CC-32786.85-38.8219.39--30.232.29--

2.4 Hp菌體蛋白電泳與CJ分型血清間的交叉反應(yīng)

2.4.1 CP菌體蛋白SDS-PAGE Hp的主要條帶Mr約為25100，28200，44700，62000，70800，81900，12600七條。CJ/CC條帶相似，其主要條帶Mr約為63000，89100和100000。

2.4.2 CP與CJ抗原交叉反應(yīng)可見除CJ-22502免疫獲得的Penner45型血清與絕大部分Hp菌株（28株中的19株）及PennerV組多價(jià)血清與Hp-85607有較強(qiáng)的交叉反應(yīng)外，其余幾乎無免疫學(xué)上的交叉（表6）。Hp-85067與V組多價(jià)血清的因子血清的反應(yīng)結(jié)果見表7。

表7 Hp-85067與V組因子血清間的抗原抗體交叉反

CP菌株CJ免疫菌株號(hào)78777675686522023Penner分型血清3736353426234CP850671:640--+++++++++-+++CP850671:1280--+++++++++-+++