《醫(yī)院藥學(xué)》 二十三、藥品的溶血試驗、局部剌激及過敏試驗

一、溶血試驗法

本法系將一定量的供試品加到2%兔血生理鹽水混懸液中觀察有無溶血和凝集現(xiàn)象，作為中藥注射劑安全檢查項目之一。

（一）2%兔血生理鹽水混懸液的配制 從健康家兔耳靜脈或心臟取血2ml，加生理鹽水稀釋至100ml搖勻即得。

（二）供試品衡釋液的配制甲液取供試品溶液0.5ml，加生理鹽水稀釋至100ml，搖勻即得。

乙液 取供靜脈注射的供試品溶液1.0ml，加生理鹽水稀釋至10ml，搖勻即得。

（三）試驗方法 取干凈試管3支，按下列順序加入各種溶液，各管搖勻，置37℃恒溫水浴中靜置觀察1小時。

試 管1管2管3管樣品稀釋液（甲）2 ml－－樣品稀釋液（乙）－2 ml－生理鹽水對照－－2 ml2%兔血混懸液2 ml2 ml2 ml

結(jié)果判斷 1小時后取出各管觀察，第一管如出現(xiàn)紅色澄清液，則為血陽性，不宜供注射用。第1管或第2管如出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集，經(jīng)搖勻后紅細(xì)胞仍不均勻散開或出現(xiàn)藥物性沉淀，則為凝集陽性，都不宜供靜脈注射用。第3管對照組應(yīng)無溶血及凝集現(xiàn)象發(fā)生。

二、局部剌激試驗法

家兔股四頭肌法 本法系將一定量的供試品注射家兔股四頭肌內(nèi)，在規(guī)定時間內(nèi)，部開肌肉觀察供試品對局部肌肉剌激反應(yīng)的情況，以判斷供試品的局部剌激試驗是否符合規(guī)定。

試驗方法 取健康無傷、體重在2.0kg以上的家兔（雌雄均勻）2只，分別在后左、右兩腿肥肉四頭肌內(nèi)各注入藥品1ml，48小時后處死動物，取出股四頭肌，縱向剖開，觀察局部剌激反應(yīng)。并按下表記錄相的剌激強度，然后算出4塊股四頭肌反應(yīng)級的總和。如各肥股四頭反應(yīng)的最高與最低級之差大于2時，應(yīng)另取2只家兔復(fù)試，方法同上。

剌激強度與剌激反應(yīng)對照表

剌激強度剌激反應(yīng)的情況0級無明顯變化1級輕度充血：范圍在0.5×1.0cm 以下2級中度充血：范圍在0.5×1.0cm 以上3級重度充血：伴有肌肉變色4級出現(xiàn)壞死：有褪色變性5級出現(xiàn)廣泛性壞死

結(jié)果判斷

（一）在初度或復(fù)試的2只家兔4塊股四頭肌剌激強度的反應(yīng)級之和，或在10以下老帥是認(rèn)為樣品的局部剌激試驗符合規(guī)定。試驗注意事項在對家兔進行注意前，應(yīng)用知覺方法使家兔固定，注射時要防止動物躁動或注射針頭晃動，造成非藥物性損傷，影響判斷結(jié)果。

（二）家免點眼法取家兔5只，左眼點藥，右眼對照，將供試液和生理鹽水各2滴分別滴入左右眼結(jié)膜襄內(nèi)，觀察至數(shù)小時后（對有剌激的藥液，則應(yīng)觀察到作用完全消失，結(jié)膜完全恢復(fù)正常），角膜有無紅腫、充血、流淚以及能否恢復(fù)等。

三、過敏點眼法

本法系指在試驗條件下，檢查供試品是否會引起的過敏的一種方法。

（一）試驗方法：取體重250-350g健康豚鼠6只，每只鼠隔日腹腔注射供試品0.5ml，共注射3次。然后分為2組，每組3只，分別于第1次注射后14日及21日再靜脈注射供試品1ml，觀察豚鼠在注射后15分鐘內(nèi)有否明顯的豎毛、興奮不安、呼吸困難、連續(xù)咳嗽、紫紺、呼吸困難、虛脫及窒息死亡等現(xiàn)象。

過敏反應(yīng)癥狀與級別劃分對照表

反應(yīng)級別過敏反應(yīng)癥狀＋＋＋過敏性休克死亡＋＋咳嗽并們有呼吸困難或痙亦抽搐等＋連續(xù)咳嗽數(shù)次以上，并伴有抓鼻子或顫抖、豎毛等±只有輕微抓鼻子、顫抖、豎毛等無任何明顯反應(yīng)

（二）結(jié)果判斷反應(yīng)級別為＋、＋＋、＋＋＋時，則供試品過敏性試驗認(rèn)為不合格。當(dāng)反應(yīng)級別為0，±時，則該供試品過敏試驗認(rèn)為合格。

（三）試驗注意事項

1．如供試品為中藥注射劑，則取供試品或中間體藥液與氧化免凝膠按1：1混合后，于每只豚鼠兩側(cè)腋下分別皮下各注射0.5ml作致敏注射。然后于14日及21日各取致敏豚鼠3只，靜脈注射供試品2ml，進行攻南擊，觀察豚鼠反應(yīng)。

2．致敏注射時，應(yīng)按無菌操作。