燈盞花乙素單體(朗瑞西樂(lè))研究進(jìn)展

為加快我國(guó)西部地區(qū)醫(yī)藥科學(xué)的發(fā)展,提高西部地區(qū)心腦血管疾病的診療水平,2006年8月5日-6日第7屆全國(guó)心腦血管疾病高級(jí)學(xué)術(shù)論壇在青海省西寧市舉行。在本次論壇上,北京大學(xué)人民醫(yī)院孫寧玲教授主持召開(kāi)了燈盞花乙素單體(朗瑞西樂(lè))研究進(jìn)展衛(wèi)星會(huì),第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院蘇定馮教授向與會(huì)者介紹了朗瑞西樂(lè)在基礎(chǔ)研究方面取得的新進(jìn)展。

燈盞花素制劑的原料是從菊科植物短葶飛蓬的干燥全草——燈盞花中提取分離得到的,目前對(duì)該種植物的研究較多,其中燈盞花乙素是唯一作用明確的活性成分。通過(guò)紫外光譜、紅外光譜及磁共振等方法確定燈盞花乙素的結(jié)構(gòu)式為5,6,4’—三羥基黃酮—7—葡萄糖醛酸甙。

燈盞花乙素可通過(guò)多種作用機(jī)制實(shí)現(xiàn)其對(duì)急性腦缺血的明顯保護(hù)作用:可抑制血小板聚集,抑制體內(nèi)凝血功能和促進(jìn)纖溶活性,從而抑制血栓形成;通過(guò)抑制蛋白激酶C激活所致的腦血管痙攣收縮,增加局部腦血流量,改善腦微循環(huán),減少炎性細(xì)胞黏附浸潤(rùn),保護(hù)缺血后腦組織;還能加快腦血流速度,增加腦血流量,改善微循環(huán),最終改善血液流變學(xué)。

同時(shí),燈盞花乙素對(duì)心肌也有保護(hù)作用。在燈盞花素抗家兔心肌缺血再灌注損傷的藥理研究中,將實(shí)驗(yàn)家兔隨機(jī)分為3組,各組家兔均結(jié)扎左室支40分鐘,松開(kāi)結(jié)扎線(xiàn)再灌流30分鐘。Ⅰ組在結(jié)扎前10分鐘由耳靜脈輸入燈盞花素,Ⅱ組輸入維拉帕米,Ⅲ組靜注同容積生理鹽水。在結(jié)扎前及結(jié)扎、再灌后每10分鐘,測(cè)左室內(nèi)壓峰值(LVSP)。結(jié)果顯示,再灌注后30分鐘內(nèi),燈盞花素組LVSP下降程度比生理鹽水組及維拉帕米組小,差異有極顯著意義(P<0.01)。此外,其他心肌保護(hù)機(jī)制還包括:抑制肌酸磷酸激酶(CPK)釋放,抑制Ca2+內(nèi)流,舒張冠脈血管,降低血液黏度,增加冠脈血流量等。

雖然燈盞花乙素對(duì)缺血性腦血管病及冠心病的治療有非常明確的療效,但是由于提取工藝的限制,目前燈盞花制劑普遍存在燈盞花乙素純度不高,療效不穩(wěn)定的情況。朗瑞西樂(lè)(諾氏制藥生產(chǎn))是通過(guò)先進(jìn)工藝生產(chǎn)出的高純度燈盞花乙素單體制劑。因此,蘇教授等對(duì)朗瑞西樂(lè)和普通燈盞花素的藥物純度和主要藥物效應(yīng)進(jìn)行了比較。

朗瑞西樂(lè)純度研究

中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所采用高效液相的方法,比較了朗瑞西樂(lè)原料與其他市售產(chǎn)品燈盞花乙素的含量。從朗瑞西樂(lè)原料液相圖與標(biāo)準(zhǔn)品液相圖比較可見(jiàn),朗瑞西樂(lè)原料的純度與標(biāo)準(zhǔn)品非常接近。相比之下,目前市售燈盞花制劑則含較多極性與燈盞花乙素差距較大的雜質(zhì),且燈盞花乙素含量與標(biāo)準(zhǔn)品差距較大。通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn),朗瑞西樂(lè)產(chǎn)品所用原料燈盞花乙素含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于市售其他原料(高10%~20%),而原料的純度為制劑的有效性和安全性提供了保證。

朗瑞西樂(lè)藥理作用研究

第二軍醫(yī)大學(xué)藥理學(xué)教研室進(jìn)行了朗瑞西樂(lè)與燈盞花素注射液主要藥效學(xué)和急性毒性的比較研究。

1.急性毒性試驗(yàn)

研究者選取昆明種小鼠,采用腹腔注射給藥,計(jì)算各組小鼠的死亡數(shù),觀察14天,計(jì)算2個(gè)藥物的LD50。結(jié)果顯示,兩藥的LD50接近,朗瑞西樂(lè)的LD50為2402mg/kg,燈盞花素LD50為2682mg/kg。

2.對(duì)冠脈結(jié)扎大鼠心肌梗死面積的影響

選取SD雄性大鼠,設(shè)2~3個(gè)劑量組及溶劑對(duì)照組。采用乙醚麻醉,結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支,造成急性心梗模型,4小時(shí)后處死動(dòng)物,取心臟稱(chēng)左室重,然后將左室沿矢狀切面剖開(kāi),置0.1%四硝基唑氮藍(lán)溶液中染色,觀察梗死面積,做出藥物對(duì)心肌梗死面積影響的量效曲線(xiàn)。

結(jié)果顯示,朗瑞西樂(lè)15mg/kg組、50mg/kg組大鼠心梗范圍顯著少于對(duì)照組,梗死區(qū)重與左心重比值與對(duì)照組相比有顯著差異;而燈盞花素注射液各劑量組則不能減少急性心肌梗死大鼠心梗范圍。

3.對(duì)大腦中動(dòng)脈阻斷大鼠腦梗死面積的影響

采用SD雄性大鼠,水合氯醛麻醉,大鼠仰臥固定,分離一側(cè)頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈和頸內(nèi)動(dòng)脈,將一細(xì)尼龍線(xiàn)(直徑約0.27mm)緩慢插入大腦中動(dòng)脈,阻斷該動(dòng)脈血流,制作局灶性腦梗模型。經(jīng)靜脈給藥,24小時(shí)后進(jìn)行行為學(xué)評(píng)分,處死動(dòng)物,取出大腦做2%氯化三苯基四氮唑(TTC)染色,用計(jì)算機(jī)化圖像分析系統(tǒng)計(jì)算腦梗死面積,做出藥物對(duì)腦梗死面積影響的量效曲線(xiàn)。

結(jié)果顯示,朗瑞西樂(lè)各劑量組腦梗死區(qū)面積/危險(xiǎn)區(qū)面積比值均顯著低于對(duì)照組(對(duì)照組、朗瑞西樂(lè)5mg/kg組、15mg/kg組、50mg/kg組分別為59±7、44±3、40±2、33±6,P值均<0.01),同樣,燈盞花素各劑量組腦梗死區(qū)面積/危險(xiǎn)區(qū)面積比值也均顯著低于對(duì)照組(P<0.01),但梗死面積減少程度不如朗瑞西樂(lè)各組。

4.對(duì)麻醉犬急性心肌梗死的保護(hù)作用

取雜種犬,體重10~13公斤,雌雄各半,每組6只,分3組。采用戊巴比妥鈉麻醉,氣管插管,接呼吸機(jī),開(kāi)胸后行機(jī)械通氣,記錄心外膜電圖。常規(guī)手術(shù)分離左冠狀動(dòng)脈前降支第一和第二分叉中間部位,用兩步結(jié)扎法造成急性心肌缺血模型,給受試藥物后30、60、120、180分鐘時(shí)記錄心電圖。180分鐘后取心臟,稱(chēng)全心重量和左心室重。然后將左室切成0.5~1cm厚的心肌片,用生理鹽水洗凈,置37℃0.1%氯化硝基四氮唑藍(lán)溶液染色。給藥后主要觀察指標(biāo)為心外膜電圖ST段抬高程度,心肌梗死范圍等定量指標(biāo)。

結(jié)果顯示,對(duì)照組結(jié)扎未給藥時(shí)心外膜電圖ST段抬高程度與給藥后無(wú)顯著差異,朗瑞西樂(lè)組給藥30分鐘后,心外膜電圖ST段抬高即開(kāi)始回落,與結(jié)扎未給藥時(shí)相比有顯著差異(P<0.01),給藥后60~180分鐘,心外膜ST段抬高進(jìn)一步回落。值得注意的是,燈盞花素組用藥后30、60分鐘時(shí)心外膜電圖ST段抬高較結(jié)扎未給藥時(shí)無(wú)明顯改變,但用藥后120、180分鐘時(shí),心外膜電圖ST段反而進(jìn)一步抬高。

對(duì)3組動(dòng)物心肌梗死范圍進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn),朗瑞西樂(lè)組梗死區(qū)重/左心重比值最低,表明該組心梗范圍最小。研究者進(jìn)一步對(duì)朗瑞西樂(lè)的作用機(jī)制進(jìn)行了探討研究,觀察了朗瑞西樂(lè)抗心肌缺血的有效劑量(50mg/kg)對(duì)心肌梗死犬缺血區(qū)心肌細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果顯示,朗瑞西樂(lè)組心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著低于對(duì)照組(34.7%±4.25%對(duì)41.8%±2.77%,P<0.05),表明朗瑞西樂(lè)能顯著抑制心肌細(xì)胞凋亡。

小 結(jié)

朗瑞西樂(lè)對(duì)減少急性心梗大鼠梗死面積、減少腦梗死面積有明確作用;

朗瑞西樂(lè)注射液對(duì)大鼠急性心梗和腦梗的療效優(yōu)于燈盞花素注射液。