枸杞制藥廢渣中粗多糖的提取純化與相關成分分析

近年來，對寧夏枸杞多糖的藥理與臨床研究已有很多報道，證明其具有增強免疫、抗氧化、抗衰老、抗腫瘤、降血脂、保肝等多方面活性。枸杞在制成藥酒、口服液等劑型應用時，多采用50度白酒或低度醇浸提，其醇提后殘渣多被棄掉。為了開展對枸杞的綜合利用，我們從吉林產的枸杞制藥廢渣中提取出粗多糖，并對其進行了組分鑒定與相關成分分析。

1材料與儀器

材料為吉林省通榆產枸杞（系指吉林省通榆縣引種的茄科植物寧夏枸Lycium barbarum

L.的干燥成熟果實。以下簡稱吉林枸杞，經50度白酒提取后的制藥廢渣經水提、醇析后得到的棕色無定形粉末。各單糖標準品均為上海試劑二廠的生化試劑，其他化學試劑均為分析純。721型分光光度計，島津-GC7A型氣相色譜儀。

2方法與結果

2.1吉林枸杞制藥廢渣中粗多糖的提取純化

將吉林枸杞用50度白酒浸提、過濾，得到濾液（供制藥酒等用）和制藥廢渣。后者用沸水煮提3次，依次為3，2，1h，過濾，濾液濃縮至糖漿狀，加95%乙醇醇析，使含醇量達到80%以上，醇析物油干，依次用95%乙醇、丙酮、乙醚、無水乙醇洗滌，60℃真空干燥，研細稱重，得到棕色無定形粉末，即為吉林枸杞制藥廢渣粗多糖（總多糖），收率為4.1%。

枸杞總多糖經DEAE纖維素（OH-型）柱層析次用水、0.01～0.1mol.L-1NaHCO3,0.01～1

mol.L-1NaOH水溶液洗脫（硫酸-苯酚法進行監(jiān)測），其中用水洗脫部分得到的洗脫曲線為一寬峰且有裂分，用其他洗脫液洗脫則無洗脫峰。

枸杞總多糖經葡聚糖凝膠G-200柱層析，用水洗脫（硫酸-苯酚法監(jiān)測，流速30ml.h-1，每管3ml），結果得到的洗脫曲線為一個寬峰且有裂分。

2.2吉林枸杞總多糖的溶解性與呈色反應

枸杞總多糖可溶于水及堿水，難溶于乙醇、丙酮、氯仿等有機溶劑，與硫酸-苯酚試劑呈棕紅色；與硫酸-蒽酮呈深綠色；與硫酸-咔唑呈粉紅色。

2.3吉林枸杞總多糖的組分鑒定

2.3.1紙層色譜鑒定

2.3.1.1酸解物的制備 稱取枸杞總多糖粉末200mg，用1

mol·L-1H2SO4100ml溶解，分裝于10個磨口刻度試管內各10ml，封嚴密塞。置沸水浴中12h，然后取出，將酸解液倒入小燒杯中以BaCO3調pH值到7，抽濾，再將濾液通過732型（H+）陽離子交換柱，流出液濃縮至少許，收集于磨口試管中，供紙層色譜點樣用。

2.3.1.2總多糖的紙層色譜鑒定 將枸杞總多糖制備的酸解物，各標準單糖以及總標準單糖（即各標準單糖的混合物）分別點于新華3號層析濾紙（20

cm×30cm）上，以正丁醇-苯-吡啶-水（5:1:3:3）為展開劑，展開約17h，用苯胺-鄰苯二甲酸顯色，于105℃恒溫干燥10min。

根據總多糖酸解物樣品與各標準單糖在紙層色譜上的Rf值與斑點顏色進行對照的結果，可初步判定總多糖是由半乳糖醛酸、半乳糖、葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖、木糖、鼠李糖等單糖所組成。

2.3.2氣相色譜鑒定

使用島津-GC7A型氣相色譜儀，氫焰離子化檢測器，2m×4mm玻璃柱，擔體為101白色擔體（60～80目），5%SE-30為固定液，柱溫180℃，載氣（N2）流速為50ml·min-1。

稱取枸杞總多糖10mg，懸浮于2

mol·L-1HCl-無水甲醇溶液10ml中，封管，80℃水解24h。Ag2CO3中和，抽濾，濾液減壓蒸干，置硅膠干燥器中放置過液，用0.2ml吡啶溶解，加六甲基二硅胺烷及三甲基氯硅烷（2:1）0.15ml，于50～60℃放置5min后進樣。用標準單糖的三甲基硅烷衍生物做對照。

2.4吉林枸杞制藥廢渣粗多糖中總多糖含量分析

組分鑒定實驗證明，吉林枸杞制藥廢渣總多糖是由半乳糖醛酸、半乳糖、葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖、木糖、鼠李糖等7種以上單糖組成的酸性雜多糖。因此本實驗總多糖的含量測定，是采用與總多糖組成相似的標準單糖混合物為標準品，精密稱定，用蒸餾水定容得到濃度為97.6μg·ml-1的標準溶液；另取吉林枸杞制藥廢渣粗多糖（以下簡稱樣品）約25mg共5份，精密稱定，用蒸餾水溶解定容，使其濃度為100μg·ml-1左右的樣品溶液（標準品與樣品均須預先干燥至恒重）。

按硫酸-苯酚法，用721型分光光度計在波長490nm處比色測定吸收度A，建立回歸方程：A=0.006742W+0.0029,r=0.9991，平均回收率為99.55%。樣品中總多糖平均含量X=18.16%，S=0.039，RSD=0.21%。

2.5吉林枸杞制藥廢渣粗多糖中半乳糖醛酸的含量分析

半乳糖醛酸是吉林枸杞制藥廢渣粗多糖中的重要組分，故采用預先干燥至恒重的半乳糖醛酸為標準品，精密稱定，用蒸餾水溶解定容，得濃度為99.6μg·ml-1的標準溶液；樣品溶液的濃度同前述總多糖測定項下。

按硫酸-咔唑法，用721型分光光度計在波長530nm處比色測定吸收度A，建立回歸方程：A=0.009312W-0.02929,r=0.9991。平均回收率為102.0%，測得樣品中半乳糖醛酸的平均含量X=6.94%，S=0.035，RSD=0.504%。

3小結與討論

3.1采用水醇法從吉林枸杞制藥廢渣中提取的粗多糖收率為4.1%。

3.2

吉林枸杞制藥廢渣粗多糖為棕色粉末，含色素較多，而色素是陰離子，可被DEAE纖維素（OH-型）柱所吸附，用水不能洗脫，故水洗脫液無色。依次用不同濃度的NaHCO3，NaOH水溶液洗脫時，部分色素也能洗脫，隨堿度增加，洗脫液顏色亦加深。故DEAE纖維素（OH-型）柱對枸杞制藥廢渣粗多糖有很好的脫色純化作用。

3.3

根據吉林枸杞制藥廢渣總多糖在DEAE纖維素（OH-型）和葡聚糖凝膠G-200兩個柱上的洗脫曲線均為寬峰且有裂分，故可初步判斷該總多糖不止含有1種多糖。

3.4

紙層色譜與氣相色譜結果均表明，吉林枸杞制藥廢渣總多糖是由半乳糖醛酸、半乳糖、葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖、木糖、鼠李糖等單糖組成的，氣相色譜結果還進一步證明，總多糖是以阿拉伯糖為主體的酸性雜多糖，其中阿拉伯糖占總糖含量的42.27%。

3.5

本文認為綜合利用枸杞制藥廢渣巾的多糖，將其作為免疫增強劑等藥物加以開發(fā)和利用是十分有意義的。樣，可在利用枸杞白酒或低度醇提取物的前提下，進一步重復利用制藥廢渣中的多糖，并可為枸杞的綜合利用開拓新的途徑。