《生物化學(xué)與分子生物學(xué)》 一、根據(jù)重組載體的標(biāo)志作篩選

最常見的載體攜帶的標(biāo)志是抗藥性標(biāo)志，如抗氨芐青霉素（anpr）、抗四環(huán)素(terr)、抗卡那霉素(kanr)等。當(dāng)培養(yǎng)基中含有抗生素時(shí)，只有攜帶相應(yīng)抗藥性基因載體的細(xì)胞才能生存繁殖，這就把凡未能接受載體DNA的細(xì)胞全部篩除掉了。如果外源目的序列是插入在載體的抗藥性基因中間使這抗藥性基因失活，這個(gè)抗藥性標(biāo)志就會消失。例如質(zhì)粒pBR322含有anpr、和terr兩個(gè)抗藥基因，若將目的序列插入terr基因序列中，轉(zhuǎn)化大腸桿菌，讓細(xì)菌放在含氨芐青霉素或四環(huán)素培養(yǎng)基中，凡未接受質(zhì)粒DNA的細(xì)胞都不能生長；凡在含氨芐青霉素和四環(huán)素中都能生長的細(xì)菌是含有質(zhì)粒pBR322的，但其pBR322未插入目的序列，凡在氨芐青霉素中能生長、而在四環(huán)素中不能生長的細(xì)菌就很可能是含有目的序列的重組質(zhì)粒。

載體含有l(wèi)acZ’的藍(lán)白篩選法，近年更被廣泛應(yīng)用。例如將目的序列插入前面述及的質(zhì)粒pUC19的多克隆位點(diǎn)，轉(zhuǎn)化大腸桿菌，放入含氨芐青霉素、IPTG、X-gal的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，凡能生長并呈白色的菌落，其細(xì)菌中就很可能含有插入目的序列的重組質(zhì)粒，這樣就很容易獲得目的序列的克隆。

根據(jù)重組載體的標(biāo)志來篩選，可以篩選去大量的非目的重組體，但還只是粗篩，例如細(xì)菌可能發(fā)生變異而引起抗藥性的改變，卻并不代表目的序列的插入，所以需要做進(jìn)一步細(xì)致的篩選。