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目的序列與載體DNA正確連接的效率、重組導入細胞的效率都不是百分之百的,因而最后生長繁殖出來的細胞并不同都帶有目的序列。一般一個載體只攜帶某一段外源DNA,一個細胞只接受一個重組DNA分子。最后培養(yǎng)出來的細胞群中只有一部分、甚至只有很小一部分是含有目的序列的重組體(recombinant)。將目的重組體篩選出來就等于獲得了目的序列的克隆,所以篩選(dcreening)是基因克隆的重要步驟。在構(gòu)建載體,選擇宿主細胞、設計分子克隆方案時都必須仔細考慮篩選的問題。以下就常用技術(shù)的基本原理加以介紹。
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目的序列與載體DNA正確連接的效率、重組導入細胞的效率都不是百分之百的,因而最后生長繁殖出來的細胞并不同都帶有目的序列。一般一個載體只攜帶某一段外源DNA,一個細胞只接受一個重組DNA分子。最后培養(yǎng)出來的細胞群中只有一部分、甚至只有很小一部分是含有目的序列的重組體(recombinant)。將目的重組體篩選出來就等于獲得了目的序列的克隆,所以篩選(dcreening)是基因克隆的重要步驟。在構(gòu)建載體,選擇宿主細胞、設計分子克隆方案時都必須仔細考慮篩選的問題。以下就常用技術(shù)的基本原理加以介紹。