《生物化學(xué)與分子生物學(xué)》 (一)變構(gòu)調(diào)節(jié)

1.變構(gòu)調(diào)節(jié)的概念　某些物質(zhì)能與酶分子上的非催化部位特異地結(jié)合，引起酶蛋白的分子構(gòu)象發(fā)生改變，從而改變酶的活性，這種現(xiàn)象稱為酶的變構(gòu)調(diào)節(jié)或稱別位調(diào)節(jié)(allosteric regulation)。受這種調(diào)節(jié)作用的酶稱為別構(gòu)酶或變構(gòu)酶(allostericenzyme)，能使酶發(fā)生變構(gòu)效應(yīng)的物質(zhì)稱為變構(gòu)效應(yīng)劑(allosteric effector);如變構(gòu)后引起酶活性的增強(qiáng)，則此效應(yīng)劑稱為激活變構(gòu)劑(allosteric activator)或正效應(yīng)物；反之則稱為抑制變構(gòu)劑(allostericinhibitor)或負(fù)效應(yīng)物。變構(gòu)調(diào)節(jié)在生物界普遍存在，它是人體內(nèi)快速調(diào)節(jié)酶活性的一種重要方式?，F(xiàn)將某些代謝途徑的變構(gòu)效應(yīng)劑列表如下：

表9-1　糖和脂肪代謝酶系中某些變構(gòu)酶及其變構(gòu)效應(yīng)劑

代謝途徑變構(gòu)酶激活變構(gòu)劑抑制變構(gòu)劑糖氧化分解已糖激酶G-6-P磷酸果糖激酶AMP、ADP、FDP、PiATP、檸檬酸丙酮酸激酶FDPATP、乙酸CoA異檸檬酸脫氫酶AMPATP、長(zhǎng)鏈脂酰CoA檸檬酸合成酶ADP、AMPATP糖異生果糖-1，6-二磷酸酶AMP丙酮酸羥化酶乙酰CoA、ATP脂肪酸合成乙酰CoA羥化酶檸檬酸、異檸檬酸長(zhǎng)鏈脂酰CoA

2.變構(gòu)調(diào)節(jié)的生理意義　變構(gòu)效應(yīng)在酶的快速調(diào)節(jié)中占有特別重要的地位。在前面已經(jīng)提及，代謝速度的改變，常常是由于影響了整條代謝通路中催化第一步反應(yīng)的酶或整條代謝反應(yīng)中限速酶的活性而引起的。這些酶對(duì)底物不遵守米曼氏動(dòng)力學(xué)原則。它們往往受到一些代謝物的抑制或激，這些抑制或激活作用大多是通過(guò)變構(gòu)效應(yīng)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。因而,這些酶的活力可以極靈敏地受到代謝產(chǎn)物濃度的調(diào)節(jié)，這對(duì)機(jī)體的自身代謝調(diào)控具有重要的意義。例如，變構(gòu)酶對(duì)于人體能量代謝的調(diào)節(jié)具有重要意義。在休息狀態(tài)下，機(jī)體能量消耗降低，ATP在細(xì)胞內(nèi)積聚，而ATP是磷酸果糖激酶的抑制變構(gòu)劑，所以導(dǎo)致F－6－P和G－6－P的積聚，G－6－P又是已糖激酶的抑制變構(gòu)劑，從而減少葡萄糖的氧化分解。同時(shí)，ATP也是丙酮酸激酶和檸檬酸合成酶的抑制變構(gòu)劑，更加強(qiáng)了對(duì)葡萄糖氧化分解的抑制，從而減少了ATP的進(jìn)一步生成。反之，當(dāng)體內(nèi)ATP減少而ADP或AMP增加時(shí)，AMP則可抑制果糖1，6－二磷酸酶，降低糖異生，同時(shí)激活磷酸果糖激酶和檸檬酸合成酶等酶，加速糖的分解氧化，利于體內(nèi)ATP的生成。這樣，通過(guò)變構(gòu)調(diào)節(jié)，使體內(nèi)ATP的生成不致過(guò)多或過(guò)少，保證了機(jī)體的能源被有效利用。

圖9－1　變構(gòu)酶的底物濃度曲線

3.變構(gòu)調(diào)節(jié)的機(jī)理　目前已知，能受變構(gòu)調(diào)節(jié)的酶，常常是由兩個(gè)以上亞基組成的聚合體。有的亞基與作用物結(jié)合，起催化作用，稱為催化亞基；有的亞基與變構(gòu)劑結(jié)合，發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，稱調(diào)節(jié)亞基。但也可在同一亞基上既存在催化部位又存在調(diào)節(jié)部位。變構(gòu)劑與調(diào)節(jié)亞基(或部位)間是非共價(jià)鍵的結(jié)合，結(jié)合后改變酶的構(gòu)象(如,變?yōu)槭杷苫蚓o密)，從而使酶活性被抑制或激活。變構(gòu)酶與米－曼氏酶不同，其動(dòng)力學(xué)不符合米曼氏方程式：酶促反應(yīng)速度和作用物濃度的關(guān)系曲線不呈矩形而常常呈S形，S形曲線與氧合血紅蛋白的解離曲線相似(圖9－1)。

當(dāng)變構(gòu)劑與調(diào)節(jié)亞基(或部位)結(jié)合后，變物劑對(duì)酶分子的構(gòu)象發(fā)生什么樣的影響呢?下面以果-1，6-二磷酸酶為例闡述這一過(guò)程。果糖-1，6-二磷酸酶是由四個(gè)結(jié)構(gòu)相同的亞基所組成，每個(gè)亞基的分子量約為310，000Da。每個(gè)亞基上既有催化部位也有調(diào)節(jié)部位。在催化部位上能結(jié)合一分子FDP，在調(diào)節(jié)部位上能結(jié)合一分子變構(gòu)劑。此酶有兩種存在形式，即緊密型(T型、高活性)與松弛型(R型、低活性)。AMP是此酶的抑制變構(gòu)劑。當(dāng)酶處于T型時(shí)，因其調(diào)節(jié)部位轉(zhuǎn)至聚合體內(nèi)部而難以與AMP結(jié)合，故對(duì)AMP不敏感而表現(xiàn)出較高的活性。在第一個(gè)AMP分子與調(diào)節(jié)部位結(jié)合后，T型逐步轉(zhuǎn)變成R型，各亞基構(gòu)象相繼發(fā)生改變，調(diào)節(jié)部位相繼暴露，與AMP的親和力逐步增加，酶的活性逐漸減弱，這就是果糖-1，6-二磷酸酶由緊密型變成松弛型的變構(gòu)過(guò)程。抑制變構(gòu)劑促進(jìn)高活性型至低活性型的轉(zhuǎn)變，激活變構(gòu)劑則促進(jìn)低活性型至高活性型的轉(zhuǎn)變。這一變構(gòu)過(guò)程是可逆的(圖9－2)。圖中3－磷酸甘油醛和脂肪酸－載體蛋白可使活性型轉(zhuǎn)變?yōu)楦呋钚孕汀?/p>

圖9－2　果糖－1，6二磷酸酶的變構(gòu)效應(yīng)

△：酶亞基上的催化部位　X：酶亞基上的調(diào)節(jié)部位　FDP：果糖-1，6－二磷酸

變構(gòu)效應(yīng)劑可以是酶的底物，也可以是酶系的終產(chǎn)物，還有的是與它們結(jié)構(gòu)不同的其他化合物，一般說(shuō)，都是小分子物質(zhì)。一種酶可有多種變構(gòu)效應(yīng)劑存在。

果糖－1，6－二磷酸酶的變構(gòu)過(guò)程是T型與R型的可逆轉(zhuǎn)變。有些酶的變構(gòu)效應(yīng)還可表現(xiàn)為酶分子的聚合或解聚，如乙酰CoA羧化酶，它是脂肪酸合成過(guò)程中的關(guān)鍵酶。它是由四種不同亞基構(gòu)成的原聚體，每個(gè)亞基有不同的功能，分別是：生物素載體蛋白，它能結(jié)合輔基生物素；生物素羧化酶，它能催化生物素發(fā)生羧化反應(yīng)；羧基轉(zhuǎn)移酶，它能將生物素上的羧基轉(zhuǎn)移給乙酰CoA形成丙二酰CoA；和調(diào)節(jié)亞基，它能與檸檬酸或異檸檬酸結(jié)合，使原聚體聚合為多聚體。Kieinschmidt等已在電子顯微鏡下看到了由檸檬酸和異檸檬酸使原聚體聚合形成的纖維狀的多聚體(圖9－3)。只有多聚體酶才有催化活性。ATPMg＋＋可使多聚體解聚為原聚體而使酶失活。長(zhǎng)鏈脂酰CoA可拮抗檸檬酸的促聚合作用，因此，它們都是該酶的變構(gòu)抑制劑。

圖9-3　乙酰CoA羧化酶聚合解聚示意圖