《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)》 四、消化系統(tǒng)藥理實(shí)驗(yàn)中的選擇與應(yīng)用

（一）消化系統(tǒng)分泌實(shí)驗(yàn)

1．胃液分泌實(shí)驗(yàn)　胃液收集常選用狗和大白鼠。由狗右側(cè)嘴角插入胃管收集胃液，大白鼠則需剖腹，從幽門端向胃內(nèi)插入一直徑約3mm的塑料管，在緊靠幽門處結(jié)扎固定，以收集胃液，可進(jìn)行胃酸的測定和胃蛋白酶的測定。

2．胰液分泌實(shí)驗(yàn)　胰液收集可選用狗、兔或大白鼠。在全麻下進(jìn)行手術(shù)，狗在主胰管開口十二指腸降部，距幽門12cm左右處，要將十二指腸翻轉(zhuǎn)，在其背面即可找到。兔的胰腺很分散，胰管位于十二指腸的升段，距離幽門約17cm左右處。分別向主胰管內(nèi)插入細(xì)導(dǎo)管收集胰液。大白鼠的胰管與膽管匯集于一個(gè)總管，在其入腸處插管固定，并在近肝門處結(jié)扎和另行插管，就可分別收集到膽汁和胰液。大白鼠的胰液很少，插入內(nèi)徑約0.5mm的透明導(dǎo)管后，以胰液充盈的長度作為觀察胰液分泌的指標(biāo)。慢性實(shí)驗(yàn)時(shí)可選用狗作胰瘺手術(shù)后收集胰液。

3．膽汁分泌實(shí)驗(yàn)為了觀察某些藥物對泌膽、排膽以及存在于膽系內(nèi)結(jié)石的影響，需要研究用藥前后膽汁流量及其成分的變化。膽汁可分別給動(dòng)物作膽囊瘺和總膽管瘺收集。膽囊瘺常選用狗、貓、兔和豚鼠進(jìn)行，而以狗為佳。在全麻下進(jìn)行手術(shù)，以右肋緣下橫切口的暴露最為滿意。如欲觀察肝膽汁的分泌情況需要結(jié)扎膽囊管或選用大鼠，因后者無膽囊，所以作總膽管造瘺手術(shù)常選用大白鼠。收集膽汁后可進(jìn)行各種膽汁的化學(xué)分析。

（二）消化系統(tǒng)運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)

1．動(dòng)物離體標(biāo)本實(shí)驗(yàn)消化道平滑肌具有肌源性運(yùn)動(dòng)的特點(diǎn)，動(dòng)物離體的腸段、膽囊、乃至胃腸肌片，只要具有合適的存活環(huán)境就可保持其運(yùn)動(dòng)機(jī)能。這是藥理學(xué)研究中常用的一種離體實(shí)驗(yàn)方法，這具有實(shí)驗(yàn)條件較易控制、操作較簡單、用一般儀器設(shè)備即能工作等優(yōu)點(diǎn)，從而應(yīng)用較廣。

標(biāo)本制備大都選用兔、豚鼠、大白鼠等動(dòng)物的組織，也可利用手術(shù)中取下或猝死剖檢時(shí)取下的消化道器官進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

取禁食24小時(shí)的動(dòng)物，通常用擊頭致斃法處死，以避免麻醉或失血等對胃腸運(yùn)動(dòng)機(jī)能的影響。立即常規(guī)剖腹，取出所需的胃、腸、膽囊等，去除附著的系膜或脂肪等組織。迅速放在充氧（或含5%CO2）、保溫（37℃）的保溫液中，并以注射器用保溫液將管腔內(nèi)的食物殘?jiān)磧?。操作時(shí)動(dòng)作要輕柔，沖洗時(shí)不宜采取高壓以免疫組織攣縮。

若以肌片為標(biāo)本，一般剪取1～5mm寬，1～2cm長的一段即可。若用動(dòng)物的腸管做實(shí)驗(yàn)時(shí)，通常取十二腸或回腸。十二指腸的興奮性、切律性較高，呈現(xiàn)活躍的舒縮運(yùn)動(dòng)。回腸運(yùn)動(dòng)比較靜息，其運(yùn)動(dòng)曲線的基線比較穩(wěn)定。所用的標(biāo)本大都取1.5cm左右一段即可。以狗的膽囊做實(shí)驗(yàn)時(shí)可截取4mm寬，2cm長的全層肌片。兔、豚鼠等的膽囊較小，取材時(shí)常與膽管一起摘下。兔的膽囊可沿其長軸一剖為二，豚鼠則可以整個(gè)膽囊或取其半進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。做膽管的離體實(shí)驗(yàn)量，通常取狗的總膽管，將相聯(lián)的十二指腸組織切除，留下乳頭以及膽道末端括約肌組織。

離體胃、腸運(yùn)動(dòng)的電活動(dòng)，除了峰形電位外還可記錄到周期性的慢波。它們在胃腸道的不同部位以及不同種屬的動(dòng)物間存在一定差異（見表10-32）。

表10-32　離體胃腸組織的慢波頻率（次/分）

2．消化器官運(yùn)動(dòng)在體實(shí)驗(yàn)　利用整體動(dòng)物觀察消化道動(dòng)物的方法很多，諸如腸管懸吊法、內(nèi)壓側(cè)定法、生物電記錄法、腹窗直視法以及X線檢查等等。這皯方法各有所長，也各有其不足之處，在進(jìn)行藥理研究時(shí)可以酌情選用。

常選用狗、貓或兔，擇其健康成年者，性別不構(gòu)。由于巴比妥麻醉劑對消化道運(yùn)動(dòng)有抑制作用，故有些作者用貓或兔做實(shí)驗(yàn)時(shí)，愿意用烏拉坦1.0～1.5g／kg靜脈或腹腔注射進(jìn)行麻醉。觀察膽道系統(tǒng)的運(yùn)動(dòng)則以母狗為佳，因?yàn)槔吖禽^大容易暴露。在禁食12～24小時(shí)后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

進(jìn)行膽道口括約肌部膽道內(nèi)壓測定實(shí)驗(yàn)時(shí)，大都選用狗或貓，也可用兔。狗的膽道位置較深，要求良好的手術(shù)暴露。貓的總膽管相對地較粗，操作也較容易，但手術(shù)耐受性稍遜于狗。兔的總膽管容易瓣認(rèn)，壺腹部明顯地呈現(xiàn)于十二指腸第1段的表面，但組織纖維，操作時(shí)務(wù)必仔細(xì)。狗的總膽管粗約2～3mm，位于十二指腸降部、循小網(wǎng)膜右緣而下，在下腔靜脈之前、門脈之右。

（三）催吐、鎮(zhèn)吐、厭食實(shí)驗(yàn)

1．催吐和鎮(zhèn)吐實(shí)驗(yàn)常選用狗和貓做實(shí)驗(yàn)。給狗皮下注射鹽酸阿樸嗎啡1mg/kg；注后2～3分鐘就可以引起惡性嘔吐。用1%硫酸銅或硫酸亞鉛溶液50ml給狗灌胃，約2～3分鐘后也可引起嘔吐，但幾乎無惡性現(xiàn)象。

2．厭食實(shí)驗(yàn)　這是防治肥胖病及其并發(fā)癥的研究內(nèi)容之一?？梢赃x用狗、貓、大鼠、小鼠等進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，猴因有頰囊，且有精神因素參與，故選用者不多。狗容易嘔吐，也有行為因素，故也不理想。一般多選用大白鼠。

（四）消化系統(tǒng)常見病動(dòng)物模型

1．胃病　急性胃炎的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ统＿x用大白鼠。實(shí)驗(yàn)前禁食24小時(shí)，以水楊酸制劑（如20ml的阿司匹林或水楊酸溶液）按100mg/kg給藥，或以10ml的醋酸或不同濃度的鹽酸（1、10、100ml），或同種動(dòng)物膽汁、2ml的?；悄懰?、15%的乙醇等單獨(dú)或幾種合用灌胃，4小時(shí)后動(dòng)物胃內(nèi)發(fā)急性彌慢性炎癥變化。

慢性胃炎的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ统＿x用慢性胃瘺狗，每日經(jīng)瘺灌70～75℃的熱水300ml，連續(xù)60天后可引胃粘膜萎縮，胃酸減少甚至缺失。還可用同種或自身的胃液（按4～5ml/kg取胃液，并濃縮50倍），或胃粘膜的生理鹽水的組織勻漿與Freund佐劑以1：1配成乳劑，皮下注射進(jìn)行免疫，隔15～30天再注射一次，即可誘發(fā)致胃粘膜發(fā)生細(xì)胞浸潤及萎縮性病變。

急性胃潰瘍的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ统＿x用200～250g的成年大白鼠，用浸水刺激造成應(yīng)激性潰瘍。

結(jié)扎大白鼠幽門可誘發(fā)成胃潰瘍，其成功率與動(dòng)物禁食情況以及結(jié)扎后經(jīng)歷的時(shí)間等有關(guān)。一般誘發(fā)成功率達(dá)85～100分，是最常用的模型之一。

組織胺法常選用雄性白色豚鼠，禁食18～24小時(shí)，全麻下找出十二指腸，在十二脂腸的膽管開口上方夾一動(dòng)脈夾造成狹窄，以使胃液潴留并防止十二脂液返流入胃。皮下注射磷酸組織胺水溶液（2.5～7.5mg/kg，根據(jù)動(dòng)物品種而劑量不同），1小時(shí)后即可恒定地復(fù)制出胃潰瘍。

慢性胃潰瘍的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ统＿x用大白鼠?？捎脽崂臃ɑ虼姿峤⒃斐晌副趽p傷形成潰瘍。熱烙法是在無菌剖腹后，以3mm粗的15W電烙鐵加熱至45℃左右，灼烙腺胃約5秒種后粘膜出現(xiàn)水腫，6小時(shí)后有明顯出血。醋酸浸潰法可用10%或20%醋酸溶液0.05ml，用0.01ml刻度的結(jié)核菌素注射器利用26號(hào)皮內(nèi)針頭作胃壁粘膜注射或以棉簽蘸100％醋酸溶液通過內(nèi)徑5mm的玻璃管涂敷胃漿膜面或剖開胃腔涂于粘膜面引起腐蝕性潰瘍。

2．腸病　腸梗阻實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ统＿x用狗。在單純結(jié)扎腸管24小時(shí)后，即可見梗阻以上腸段明顯擴(kuò)張。也可采取結(jié)扎腸系膜血管、人工造成腸套或腸扭轉(zhuǎn)等方法復(fù)制。

腸粘膜實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ屯ǔ＿x用狗，不能選草食動(dòng)物，因其闌尾無論在結(jié)構(gòu)或機(jī)能上均與人的闌尾有較大差別。狗雖也差別，但狗的闌尾粗而長，容易處理。

潰瘍性結(jié)腸炎實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ涂梢赃x用大白鼠，通過免疫方法制備。一般是用同種或異種動(dòng)物的結(jié)腸粘膜勻漿加Freund佐劑，給大白鼠足跖肉墊內(nèi)注射，約10天后隨著血清抗結(jié)腸粘膜抗體滴度的升高和便血，在盲腸與結(jié)腸出現(xiàn)潰瘍性結(jié)腸炎變化。也可給兔結(jié)腸漿膜下反復(fù)多次注射卵白蛋白或向兔的上腸系膜動(dòng)脈內(nèi)注射內(nèi)毒素均可造成潰瘍性結(jié)腸炎變化。

3．腹膜炎　細(xì)菌性腹膜炎是以生理鹽水稀釋肉湯培養(yǎng)的大腸桿菌液，制成1×108/ml菌量的懸液，給豚鼠腹腔注射可以規(guī)律性地引起嚴(yán)重的腹膜炎，大都在24～48小時(shí)內(nèi)死亡。若菌量小，毒力低，有進(jìn)就不易造成實(shí)驗(yàn)性腹膜炎，用大鼠和小鼠做實(shí)驗(yàn)時(shí)尤其如此。

4．胰腺炎　急性胰腺炎實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ痛蠖歼x用雄狗，且以體重在15公斤以上者為佳。較小的狗狗胰管細(xì)，雌狗脂肪多，均可影響手術(shù)操作。在無菌操作下，分離出主胰管。若在結(jié)扎主胰管的同時(shí)，飼以高蛋白、高脂肪食物，或注射促胰激素使胰液分泌增加，可以誘發(fā)一過性的胰腺水腫，如果在結(jié)扎胰管的同時(shí)暫時(shí)阻斷胰動(dòng)脈或以有活性的胰蛋白酶作動(dòng)脈內(nèi)注射則可導(dǎo)致現(xiàn)血性胰腺炎。

慢性胰腺炎實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ统＿x用大白鼠或豚鼠，以含0.5％量的dl-乙硫氨酸飼料喂養(yǎng)動(dòng)物1～2個(gè)月；或每日用該藥250mg作腹腔注射，連續(xù)10天即可引起胰腺泡破壞和炎細(xì)胞浸潤。也可選用大白鼠，用20％乙醇置于滴瓶中代替飲水，讓動(dòng)物自由吮吸，持續(xù)8個(gè)月以上，即可使胰腺細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)脂肪滴，線粒體和胞漿呈退行性變。若飲用20～30個(gè)月則可出現(xiàn)腺泡萎縮、腺管上皮增殖，小葉內(nèi)有散在結(jié)締組織增生以及腺管內(nèi)出現(xiàn)蛋白栓等變化。

5．膽結(jié)石　使動(dòng)物膽道發(fā)生感染，膽汁淤積，膽固醇代謝發(fā)生障礙等均可使動(dòng)物膽道形成膽石。復(fù)制膽石模型的方法很多，食餌法，常選用敘利亞地鼠，體重60g左右，喂高糖、不含非飽和脂肪酸飼料（蔗糖74%、酪蛋白21%、食鹽4.4%、膽堿0.1%、濃縮魚肝油0.5%），每只地鼠5～9g/次，每天2次，14～21天膽囊內(nèi)形成明顯結(jié)石，22天后成石率高達(dá)100%。也有選用健康雌性豚鼠，飼鼠基礎(chǔ)食料中加入酪蛋白1%、蔗糖1.5%、豬油1%、纖維素1%、膽酸0.02%、膽固醇0.05%的成石飼料，2個(gè)月后在90%的豚鼠膽囊中產(chǎn)生了以膽色素為主的結(jié)石，其成份和結(jié)構(gòu)與人類的膽色素結(jié)石相似。

感染成石法常選用健康成年家兔、大白鼠成狗。采用無菌手術(shù)，暴露家兔十二指腸，從十二指腸乳頭插入塑料管，由此管注入蛔蟲卵或大腸桿菌，同時(shí)還可從此管抽取膽汁進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)和分析。注入蛔蟲卵后7個(gè)月，膽囊內(nèi)可形成結(jié)石。狹窄成石法常選用健康成年家兔、狗或猴，但家兔的誘發(fā)率高。無菌手術(shù)探明膽道及膽囊正常，用銀夾適當(dāng)?shù)貖A住兔膽囊頸部，以產(chǎn)生部分梗阻。結(jié)果6個(gè)月后家兔膽囊中有明顯結(jié)石形成。

切除迷走神經(jīng)干成石法常選用成年狗或兔。采用無菌手術(shù)探明家兔膽道及膽囊正常，然后暴露胃、賁門及食管，將食管懸吊，暴露兩側(cè)迷走神經(jīng)干，分離后從食管下端切除兩側(cè)迷走神經(jīng)干各1.5～2cm，手術(shù)后4～5周有膽固醇結(jié)石形成。

異物植入成石法常選用成年健康狗或兔。動(dòng)物麻醉后，在無菌操作下暴露膽囊，在膽囊底部剪一小口，植入蛔蟲碎片或人膽石、線結(jié)、橡皮等，用小圓針荷包縫合剪口，植入2～3月后膽囊內(nèi)可見到多數(shù)黑色細(xì)砂，植入的異物可被墨綠色的膽石成份所包裹，若植入數(shù)個(gè)異物則有時(shí)可以被粘結(jié)成一個(gè)大的團(tuán)塊。