中醫(yī)古籍

  • 《免疫學(xué)和免疫學(xué)檢驗》 二、免疫印跡法

    免疫印跡法（immunoblottingtest，IBT）亦稱酶聯(lián)免疫電轉(zhuǎn)移印斑法（enzymelinkedimmunoelectrotransferblot，EITB），因與Southern早先建立的檢測核酸的印跡方法Southernblot相類似，亦被稱為Westernblot。免疫印跡法（圖15-12）分三個階段進行。第一階段為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）?？乖鹊鞍讟悠方?jīng)SDS處理后帶陰電荷，在聚丙烯胺凝膠中從陰極向陽泳動，分子量越小，泳動速度就越快。此階段分離效果肉眼不可見（只有在染色后才顯出電泳區(qū)帶）。第二階段為電轉(zhuǎn)移。將在凝膠中已經(jīng)分離的條帶轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上，選用低電壓（100V）和大電流（1～2A），通電45min轉(zhuǎn)移即可完成。此分階段分離的蛋白質(zhì)條帶肉眼仍不可見。第三階段為酶免疫定位。將印有蛋白質(zhì)條帶的硝酸纖維素膜（相當(dāng)于包被了抗原的固相載體）依次與特異性抗體和酶標(biāo)第二抗體作用后，加入能形成不溶性顯色物的酶反應(yīng)底物，使區(qū)帶染色。常用的HRP底物為3，3＇-二氨基聯(lián)苯胺（呈棕色）和4-氯-1-萘酚（呈藍紫色）。陽性反應(yīng)的條帶清晰可辨，并可根據(jù)SDA-PAGE加入的分子量標(biāo)準，確定各組分的分子量。本法綜合了SDS-PAGE的高分辨力和ELISA法的高特異性和敏感性，是一個有效的分析手段，不僅廣泛應(yīng)用于分析抗原組分及其免疫活性，并可用于疾病的診斷。在艾滋病病毒感染中此法作為確診試驗?？乖?jīng)電泳轉(zhuǎn)移在硝酸纖維素膜上后，將膜切成小條，配合酶標(biāo)抗體及顯色底物制成的試劑盒可方便地在實驗室中供檢測用。根據(jù)出現(xiàn)顯色線條的位置可判斷有無針對病毒的特異性抗體。

    免疫印跡法原理示意圖

    圖15-12 免疫印跡法原理示意圖

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