《免疫學(xué)和免疫學(xué)檢驗(yàn)》 一、斑點(diǎn)-ELISA

斑點(diǎn)-ELISA（dot-ELISA）的特點(diǎn)時(shí)：①以吸附蛋白質(zhì)能力很強(qiáng)的硝酸纖維素膜為固相載體；②底物經(jīng)酶反應(yīng)后形成有色沉淀，使固相膜染色。在實(shí)驗(yàn)室中斑點(diǎn)-ELISA可按下法進(jìn)行。在硝酸纖維膜上用鉛筆劃成4mm×4mm的小格，在每格中央點(diǎn)加抗原1～2μl，成為一個(gè)小點(diǎn)。干燥后將每格剪下分別放入ELISA板孔中，按ELISA方法操作，最后加入能形成不溶性有色沉淀的底物，如在膜上出現(xiàn)染色斑點(diǎn)，即為陽(yáng)性反應(yīng)（圖15-11）。因硝酸纖維素膜吸附性能強(qiáng)，一般在包被后須再進(jìn)行封閉。如將硝酸纖維素膜裁剪成膜條，并在同一張膜條上點(diǎn)有多種抗原，將整個(gè)膜條與同一份血清反應(yīng)，則可同時(shí)獲得對(duì)多種疾病的診斷結(jié)果。斑點(diǎn)-ELISA的缺點(diǎn)是操作麻煩，特別是洗滌的操作很不方便。

圖15-11 斑點(diǎn)-ELISA示意圖

應(yīng)用斑點(diǎn)-ELISA的原理，通過(guò)特殊工藝已制備出各種試劑，供臨床檢驗(yàn)用。一般分三種類型：①將試劑膜粘貼在塑料條片，便于洗滌和觀察。②將試劑膜封在小盒內(nèi)，膜下墊吸水劑，洗滌液通過(guò)膜吸入盒內(nèi)。此即斑點(diǎn)免疫滲濾試驗(yàn)（見(jiàn)第十九章）。③將試劑膜固定在小杠框格中放入特殊的自動(dòng)分析儀中檢測(cè)。應(yīng)用這一系統(tǒng)可做各種蛋白質(zhì)、激素、藥物和抗生素的定量測(cè)定。