中醫(yī)古籍
  • 《基因診斷與性傳播疾病》 五、DNA的復(fù)制

    DNA作為遺傳物質(zhì)的基本特點(diǎn)就是能夠準(zhǔn)確地自我復(fù)制,而DNA的互補(bǔ)雙螺旋結(jié)構(gòu)對于維持這類遺傳物質(zhì)的穩(wěn)定性和復(fù)制的準(zhǔn)確性都是極為重要的。

    (一)DNA復(fù)制的方式

    從前面的內(nèi)容可知,DNA是由兩條互補(bǔ)的多核苷酸鏈組成的,其中一條鏈上的核苷酸排列順序可以決定另一條鏈上的核苷酸順序。據(jù)此推測,在復(fù)制過程中,首先DNA雙螺旋的兩條多核苷酸鏈之間氫鍵斷裂,雙鏈解開,然后每條鏈各自作為模板,以脫氧核糖核苷酸為原料,按照堿基配對規(guī)律,合成新的互補(bǔ)鏈。這樣形成的兩個(gè)子代DNA分子與原來的親代DNA分子的核苷酸順序完全相同。在此過程中,每個(gè)子代分子的一條鏈來自親代DNA,另一條鏈則是新合成的。這種復(fù)制方式稱為半保留復(fù)制。實(shí)驗(yàn)證明,DNA半保留復(fù)制的方式是正確的。由于DNA在代謝上的穩(wěn)定性,經(jīng)過許多代的復(fù)制,DNA分子上的遺傳信息仍可傳給后代。

    (二)參與復(fù)制的酶類

    DNA的復(fù)制過程極為復(fù)雜,但其速度甚快,這是由于許多酶參與了復(fù)制過程。

    1.DNA聚合酶(DNApolymerase)。四種脫氧核糖核苷酸(dNTP,N代表A、T、G、C四種堿基)是DNA合成的原料。在原有DNA模板鏈存在時(shí),DNA聚合酶催化四種dNTP通過與模板鏈的堿基互補(bǔ)規(guī)律,合成新的DNA鏈,故此酶又被稱為DNA指導(dǎo)的DNA聚合酶(DNa directed DNA polymerase,縮寫為DDDP)。

    值得注意的是,DNA聚合酶不能自行從頭合成DNA鏈,而必須有一個(gè)原有的多核苷酸鏈作為引物,DNA聚合酶只能在引物的3′末端上逐步合成DNA鏈。由此可見,DNA鏈的合成方向是從5′端至3′端進(jìn)行的。

    無論在原核細(xì)胞或真核細(xì)胞中,均存在著多種DNA聚合酶,它們的性質(zhì)不完全相同。目前認(rèn)為,在真核細(xì)胞中,DNA聚合酶α在復(fù)制中起關(guān)鍵作用,而DNA聚合酶β主要在DNA損傷的修復(fù)中起作用。

    2. 引物酶。由于DNA聚合酶不能自行從頭合成DNA鏈,因此在復(fù)制過程中首先需要合成一小段RNA的多核苷酸鏈作引物,在這段RNA引物的基礎(chǔ)上引導(dǎo)DNA鏈的合成,催化RNA引物合成的酶是引物酶,實(shí)際上它是一種特殊的RNA聚合酶。

    3.DNA連接酶。因?yàn)閺?fù)制過程中,DNA鏈的合成方向只能由5′端→3′端方向進(jìn)行,因此其中有一條新鏈的合成是不連續(xù)的。起初生成的是許多短鏈。需要DNA連接酶將它們連接起來。

    4.參與DNA解旋、解鏈的酶及因子。已知DNA具有超螺旋結(jié)構(gòu)。復(fù)制時(shí)必須松弛DNA模板的超螺旋結(jié)構(gòu),并使DNA的雙鏈分開,暴露堿基,否則不可能在模板上按堿基配對原則合成新的互補(bǔ)DNA鏈。松馳模板DNA超螺旋,分開雙鏈主要由拓?fù)洚悩?gòu)酶,解鏈酶及DNA結(jié)合蛋白等來完成。

    (三)DNA復(fù)制的過程

    DNA復(fù)制大致可分為以下幾個(gè)階段。

    1.起始與引物RNA的合成

    DNA復(fù)制有固定的起始部位,在真核細(xì)胞DNA雙鏈上有多個(gè)起始部位。復(fù)制時(shí),解鏈酶等先使DNA的一段雙鏈解開,形成復(fù)制點(diǎn)。這個(gè)復(fù)制點(diǎn)的形狀象一個(gè)叉子,故稱為復(fù)制叉。引物酶能辯認(rèn)起始部位,并以四種核糖核苷酸為底物,以解開的一段DNA鏈為模板,按5′-3′方向合成RNA片段。在這一階段只合成了引物RNA,為DNA鏈的合成做好了準(zhǔn)備工作。

    2.DNA片段的生成

    在細(xì)胞內(nèi),DNA的兩條鏈都可作為模板,同時(shí)合成兩條DNA鏈。由于DNA兩條鏈?zhǔn)欠聪蚱叫械?,即一條鏈?zhǔn)?′→3′方向,而另一條鏈則是3′→5′方向。但是,DNA聚合酶催化DNA鏈的合成只能順著5′→3′方向進(jìn)行。因此,在新的DNA鏈中有一條連續(xù)合成的(稱前導(dǎo)鏈),而另一條是不連續(xù)合成的(稱隨從鏈。在隨從鏈合成過程中,先合成的是較短的片段(稱為岡崎片段),然后將這些片段再連結(jié)起來,形成完整的DNA鏈。岡崎片段的合成方向仍然是5′→3′,反應(yīng)直至下一個(gè)引物RNA的5′端為止。

    3.RNA引物的水解

    DNA片段合成一定長度后,鏈中的RNA引物被核酸酶水解而切掉。此時(shí)出現(xiàn)的缺口由DNA片段繼續(xù)延長而填補(bǔ)。

    4.完整的DNA分子的形成

    相鄰的兩個(gè)DNA片段在DNA連接酶作用下連接起來,形成大分子DNA鏈,與其對應(yīng)的模板DNA鏈一起生成子代雙螺旋DNA,即完整的DNA分子。

    DNA復(fù)制過程十分準(zhǔn)確,極少發(fā)生錯(cuò)誤,由此保證了子代DNA與親代DNA分子完全相同,這是遺傳穩(wěn)定性的重要基礎(chǔ)。某些因素可使DNA結(jié)構(gòu)改變,則導(dǎo)致子代DNA結(jié)構(gòu)的相應(yīng)變化,稱為遺傳的變異。

更多中醫(yī)書籍