《動(dòng)脈粥樣硬化》 三、彈性蛋白的提取

提取方法較多，各有優(yōu)缺點(diǎn)。1969年Bornstein和Ross先用5mol/L鹽酸胍抽提，再用膠原酶水解其他非彈性蛋白組分，最后還原二硫鍵，分離提取彈性蛋白。具體方法如下：

1．將動(dòng)脈血管壁洗凈，小心除去附著結(jié)締組織。

2．將血管壁組織浸于4℃ 50%的吡啶液，破碎組織，3kr/min離心15min。

3．取沉淀用蒸餾水洗滌3次，真空干燥后研成粉末。

4．將粉末懸浮于2mol/L NaCl,4℃攪拌24h，3kr/min離心20min，棄上清，沉淀用蒸餾水洗3次。

5．將沉淀用無(wú)水乙醇脫脂20min，用氯仿-甲醇（2：1）處理20min，再用乙醚沖洗干燥，3kr/min離心20min，真空干燥沉渣。

6．干燥的沉淀物用5倍處理液（0.5mol/LCaCl2、10.05mol/l Tris-HClpH7.5、2%膠原酶）洗滌，3kr/min離心20min。

7．將沉淀移入帶塞的瓶中，加含0.5mol/L鹽酸胍、0.1mol/l Tris-HClpH8.5、0.05mol/L二硫赤蘚糖醇，2.0mol/L EDTA液4℃過(guò)夜。

8．3kr/min離心20min，沉淀用蒸餾水洗滌2次。

9，沉淀物加入處理液（6mol/L尿素、0.1%SDS、0.05mol/L二硫赤蘚糖醇、0.05mol/l Tris-HCl pH7.7），通過(guò)氮氧真空過(guò)夜，3kr/min離心20min。

10．沉淀再真空干燥，即為彈性蛋白。