《動(dòng)脈粥樣硬化》 一、血清堿性蛋白質(zhì)的分離及其氨基酸的組成分析

最初在培養(yǎng)離體成纖維細(xì)胞和脂肪細(xì)胞時(shí)，偶然發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基中加入血清可使細(xì)胞甘油三酯（TG）的合成量增加，后來證明這是因?yàn)檠逯泻幸环N呈堿性的蛋白質(zhì)分子，根據(jù)這一特性，1988年，Cianflone采用層析法將這種蛋白質(zhì)分離出來，并依據(jù)其生理功能命名為?；饔秘菁さ鞍?，該蛋白質(zhì)分子量為14.0kD，等電點(diǎn)為9.10。1989年Kwiterovich采用IEF和SDS/PAGE技術(shù)從人血漿中分離純化三種堿性蛋白質(zhì)分子，并測得其分子量和等電點(diǎn)分別為：堿性蛋白Ⅰ（BPⅠ）14.0kD,9.10；堿性蛋白Ⅱ(BPⅡ)27.5kD,8.48；堿性蛋白Ⅲ（BPⅢ）55.0kD.8.73。分析這三種堿性蛋白質(zhì)，發(fā)現(xiàn)他們分別由不同的氨基酸組成：BPⅠ精氨酸的含量約為BPⅡ、BPⅢ的兩倍，半胱氨酸含量為BPⅢ的三倍；BPⅡ不含半胱氨酸而富含脯氨酸；BPⅢ蛋氨酸的含量是BPⅠ、BPⅡ的2～3倍，而組氨酸的含量只有BPⅠ、BPⅡ的一半，BPⅢ還富含絲氨酸。另外，這三種蛋白質(zhì)都含有較豐富的非極性氨基酸，因此當(dāng)用葡聚糖或聚丙烯酰胺對(duì)其進(jìn)行層析法分離時(shí)，觀察到的相反的現(xiàn)象可能是這些氨基酸在水相中相互作用的結(jié)果。而組成該蛋白質(zhì)分子的Asn/Asp和Gln/Glu都以酰胺基團(tuán)形式存在，保證了這些蛋白質(zhì)分子的等電點(diǎn)呈堿性。

Kwiterovich采用免疫印跡分析表明：BPⅠ只能同抗ASP免疫血清發(fā)生特異性反應(yīng)，與免疫前血清無反應(yīng)。而BPⅡ和BPⅢ都能與抗ASP免疫血清和免疫前血清發(fā)生反應(yīng)，因此沒有理由相信BPⅡ和BPⅢ與ASP是同一種物質(zhì)，但Kwiterovich認(rèn)為BPⅠ和ASP為同一種物質(zhì)，因?yàn)樵S多實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示BPⅠ和ASP具有相似的等電點(diǎn)、分子量和氨基酸組成，而且都具有?；饔眉せ钚?，但目前還沒有BPⅠ和ASP分子克隆的結(jié)果證實(shí)這一結(jié)論，見表7-1所示。

表7-1 堿性蛋白Ⅰ和?；饔秘菁さ鞍装被峤M成分析

殘　基堿性蛋白Ⅰ?；饔秘菁さ鞍啄柦M分整　數(shù)摩爾組分整　數(shù)Asp/Asn9.471210．314Clu/Gln11.761514．119Ser5.7576．69Gly9.111211．716Arg8.25105．88Cys3.0145．47Thr5.1674．97Ala7.54108．211Val5.2374．86Met1.5921．52Ile3.6152．74Leu8.03106．28Phe3.6153．24His2.9541．42Lys6.7595．27Pro5.0265．27TrpNDND殘基總數(shù)129135分子量14335Da14514Da等電點(diǎn)9.109.10

氨基酸組成分析也證實(shí)BPⅠ和ASP都含有豐富的半胱氨酸，可以憑借其形成二硫鍵產(chǎn)生廣泛的生物學(xué)效應(yīng),一般這些半胱氨酸殘基都以氧化的形式存在,當(dāng)采用含β-巰基乙醇的緩沖液來純化ASP時(shí),其生物活性會(huì)完全喪失,可見半胱氨酸的存在對(duì)維持其?；饔秘菁せ钚院苡斜匾?現(xiàn)已證明，BPⅠ、BPⅡ、BPⅢ的生理功能不同于膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（sterol carrier protein ,SCP）和脂肪酸連結(jié)蛋白（fatty-acidbinding protein ,FABP），也不同于其他堿性蛋白如髓鞘堿性蛋白（MBP）。