《中國生物制品規(guī)程》 磷含量測(cè)定

1　試劑

1.1　高氯酸。

1.2　濃硫酸。

1.3　30%過氧化氫。

1.40.04mol　/L　鉬酸銨

取鉬酸銨5g，加蒸餾水溶解成100ml。

1.5　還原劑

稱取亞硫酸氫鈉6g，亞硫酸鈉1.2g，1-氨基-2-茶酚磺酸0.1g，加蒸餾水溶解成50ml，置棕色瓶中保存，一周內(nèi)可用。

1.6　磷標(biāo)準(zhǔn)液

精確稱取已干燥至恒重的磷酸二氫鉀439.3mg，加蒸餾水溶解，移入100ml容量瓶中，稀釋至刻度，為貯備液（1mg磷/ml）。精確量取貯備液2ml，于100ml容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度，為磷標(biāo)準(zhǔn)液（20μg/ml）。

2　操作

2.1　樣品

A群腦膜炎球菌多糖菌苗成品測(cè)磷至少取三支安瓿溶解后混合使用。

精確量取一定體積樣品（含磷4～20μg）于刻度試管中，加4滴濃硫酸（約0.08ml），加熱至炭化，再加2滴高氯酸（約0.06ml），消化至無色澄清，必要時(shí)可加1～2滴30%過氧化氫，但最后必須將過氧化氫除盡。消化后稍置片刻，趁熱另2ml蒸餾水（如冷卻后加水，需再加熱），加0.4ml0.04mol　/L　鉬酸銨，混勻，加0.2ml還原劑，混勻，另蒸餾水至6ml，15～20分鐘后，于820nm波長(zhǎng)比色。

2.2　標(biāo)準(zhǔn)曲線

精確量取磷標(biāo)準(zhǔn)液（20μg　/ml）0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分別置于刻度試管中，補(bǔ)加蒸餾水至1ml，其余操作同樣品，可得一標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3　計(jì)算

從標(biāo)準(zhǔn)曲線查出樣品相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)液之ml數(shù)A。

樣品磷含量（μg　/ml）=A×20/樣品ml數(shù)

核酸含量測(cè)定

取含A群腦膜炎多糖抗原5±1mg　/ml溶液，采用紫外分光法于260nm波長(zhǎng)測(cè)定OD值，按E1%1cm=200計(jì)算核酸含量。