《中國(guó)生物制品規(guī)程》 人血白蛋白多聚體含量及人血丙種球蛋白中l(wèi)gG各組份測(cè)定（高壓液相凝膠柱色譜法）

1　儀器

1.1　高壓液相泵

1.2　高壓液相色譜柱：TSKG3000SW(直徑7.5mm,長(zhǎng)60cm)。TSk　Guard　Column　SW（直徑7.5mm，長(zhǎng)7.5cm）。

2　試劑

2.1　貯存液A：0.5mol　/L　NaH2PO4,pH4.8

稱39g　NaH2PQ4·2H2O，用超純水溶解，并稀釋至500ml。

2.2　貯存液B：0.5mol　/L　Na2HPO4

稱179.1g　Na2HPO4·12H2O，用超純水溶解，并稀釋至1000ml。

2.3　工作液C：0.2mol　/L　磷酸鹽緩沖液，Ph7.0（含1%異丙醇）

準(zhǔn)確量取200ml貯存液A、420ml貯存液B、914.5ml超純水、15.5ml異丙醇，混勻，用0.45μm水溶性膜過濾并超聲脫氣。

3　樣品處理

用生理鹽水將樣品稀釋至4mg/ml，然后用0.45μm水溶性膜過濾。

4　操作

用工作液C以0.6ml/分鐘流速平衡高壓液相系統(tǒng)至基線平穩(wěn)。取處理過的樣品25μl上柱，用工作液C以0.6ml/分鐘流速洗脫，同時(shí)在紫外檢測(cè)器280nm波長(zhǎng)下記錄色譜圖及有關(guān)數(shù)據(jù)。記錄數(shù)據(jù)的時(shí)間為60分鐘。

5　計(jì)算

5.1　人血白蛋白多聚體含量計(jì)算

用高壓液相系統(tǒng)的色譜工作站或積分儀對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，算出多聚體相對(duì)面積百分含量。再根據(jù)轉(zhuǎn)化公式換算成相對(duì)重量百分含量。

轉(zhuǎn)化公式*X（%）=Y－1.6504/1.6359

其中X為凱氏定氮結(jié)果，Y為高壓液相結(jié)果（如Y值小于1.6504，結(jié)果不用轉(zhuǎn)化成重量百分含量，但在試驗(yàn)報(bào)告中需注明為相對(duì)面積百分含量）。

5.2　人血丙種球蛋白中IgG各組份相對(duì)含量計(jì)算。

5.2.1IgG各組份峰的劃界。

圖譜中各峰的界限為兩峰間最低點(diǎn)到基線的垂直線。

5.2.2IgG各組份相對(duì)含量計(jì)算。

用高壓液相系統(tǒng)的色譜工作站或積分儀對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，算出各組份相對(duì)百分含量。

*應(yīng)根據(jù)各單位使用的HPLC儀器及層析柱型號(hào)，經(jīng)試驗(yàn)后得出轉(zhuǎn)化公式。