《中國(guó)生物制品規(guī)程》 凍干人纖維蛋白原制造及檢定規(guī)程

本品系由乙型肝炎疫苗免疫健康人的血漿中分離、提純、凍干并經(jīng)病毒滅活處理制成。主要成份為纖維蛋白原，純度在70%以上。含適量枸櫞酸鈉、氯化鈉和葡萄糖作為穩(wěn)定劑。不含防腐劑，專供靜脈輸注用。用于治療產(chǎn)后大出血及因大手術(shù)、外傷或內(nèi)出血等引起的纖維蛋白原缺乏而造成的凝血障礙。

1　制造

1.1　制造要求

1.1.1　對(duì)血漿的要求

1.1.1.1　血漿應(yīng)符合《原料血漿采集（單采血漿術(shù)）規(guī)程》要求

新鮮分離的液體血漿或冰凍血漿，去除冷沉淀以及凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ后的血漿，均可用于生產(chǎn)。

1.1.1.2　分離后的血漿應(yīng)保持無(wú)菌，否則應(yīng)及時(shí)投料制造或低溫水冰凍保存。冰凍保存期最長(zhǎng)不應(yīng)超過(guò)2年。

1.1.2　對(duì)制造工作室、設(shè)備及原材料的要求

與《人血白蛋白（低溫乙醇法）制造及檢定規(guī)程》中1.1.3～1.1.4項(xiàng)要求相同。

1.2　制造工藝

1.2.1　采用低溫乙醇法提制，并經(jīng)衛(wèi)生部批準(zhǔn)的適宜方法進(jìn)行病毒滅活處理。

1.2.2　分批

同一容器混合溶解的制品作為1批，不同機(jī)柜凍干的制品分別作為亞批。

1.2.3　溶解液及穩(wěn)定劑的規(guī)定

溶解纖維蛋白原沉淀用的溶解液所含的穩(wěn)定劑應(yīng)符合下列規(guī)定：

枸櫞酸三鈉（2H2O）　1.2%（g/ml）

注射用葡萄糖5%（g/ml）

氯化鈉0.85%（g/ml）

1.2.4　除菌過(guò)濾及分裝

制品可直接濾入無(wú)菌的成品瓶?jī)?nèi)，每瓶纖維蛋白原裝量應(yīng)不少于出品規(guī)格。

1.2.5　凍干

過(guò)濾分裝后應(yīng)立即凍結(jié)，　并按《人血白蛋白（低溫乙醇法）制造及檢定規(guī)程》1.2.5項(xiàng)的規(guī)定進(jìn)行凍干，在凍干全過(guò)程中，制品溫度不應(yīng)超過(guò)35℃。

1.2.6　半成品檢定

半成品應(yīng)抽樣做理化檢查及熱原質(zhì)試驗(yàn)，并按亞批做無(wú)菌試驗(yàn)。

1.3　劑型與規(guī)格

為凍干劑型，每瓶成品含纖維蛋白原0.5、1.0、1.5或2.0g。

2　成品檢定

2.1　抽樣

每批成品應(yīng)抽樣作全面質(zhì)量檢定，不同機(jī)柜凍干的制品應(yīng)分別抽樣做無(wú)菌及水分檢定。

2.2　物理檢查

2.2.1　外觀

應(yīng)為灰白色或淡黃色疏松體，無(wú)融化跡象。重溶后，溶液應(yīng)澄明或輕微乳光，允許有少量細(xì)小絮狀物或蛋白顆粒。

2.2.2　真空度

以高頻火花真空測(cè)定器檢測(cè)，瓶?jī)?nèi)應(yīng)出現(xiàn)藍(lán)紫色輝光。

2.2.3　溶解時(shí)間

制品溫度應(yīng)先平衡至30～37℃，按瓶簽標(biāo)示量加30～37℃注射用水，為約1%蛋白濃度溶液，制品應(yīng)在30分鐘內(nèi)完全溶解。

2.3　化學(xué)檢定

按《生物制品化學(xué)檢定規(guī)程》進(jìn)行。

2.3.1　pH值

取2.2.3項(xiàng)下溶液測(cè)定，pH值應(yīng)為6.8～7.8。

2.3.2　水分

水分含量應(yīng)≤5%（g/g）。

2.3.3　純度

取2.2.3項(xiàng)下溶液，用生理鹽水稀釋至每ml含纖維蛋白原2～3mg，用鎢酸沉淀法測(cè)定蛋白含量。

另取上述稀釋液10ml，加入每ml含0.3IU凝血酶溶液10ml，攪勻待凝固后，置一盛水的盤內(nèi)加罩密封。在室溫放置1～2小時(shí)。移置2～10℃過(guò)夜。然后攪碎凝塊，離心（或過(guò)濾）分離清液。用鎢酸沉淀法測(cè)定其殘余蛋白量，按下式計(jì)算制品的純度，應(yīng)不低于70%。

纖維蛋白原制品純度（%）=（蛋白總量—?dú)堄嗟鞍琢浚?蛋白總量×100

2.3.4　纖維蛋白原含量

根據(jù)2.3.3項(xiàng)的測(cè)定結(jié)果，按下式計(jì)算纖維蛋白原含量，應(yīng)不低于出口規(guī)格。

纖維蛋白原含量（g）=蛋白總%（g/ml）×制品純度%×總體積（ml）。

2.3.5　枸櫞酸離子測(cè)定

取2.2.3項(xiàng)下溶液測(cè)定，枸櫞酸離子含量應(yīng)為1.1%～1.3%（g/ml）。

2.3.6　葡萄糖含量

應(yīng)為4.5%～5.5%（g/ml）。

2.3.7　氯化鈉含量

應(yīng)為0.8%～0.9%（g/ml）。

2.4　凝固活力測(cè)定

于小試管內(nèi)加入凝血酶溶液（3IU/ml）0.5ml，置37℃水浴預(yù)熱1分鐘，再中入2.2.3項(xiàng)下的溶液。用生理鹽水稀釋成每ml含3mg纖維蛋白原，加0.5ml，搖勻。置37℃水浴中觀察其凝固時(shí)間。兩次測(cè)定結(jié)果平均值應(yīng)不超過(guò)60秒。

2.5　無(wú)菌試驗(yàn)

按《生物制品無(wú)菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。

2.6　安全試驗(yàn)

2.6.1　豚鼠試驗(yàn)

用體重300～400g健康豚鼠2只，每只腹腔注射檢品5ml（約1%蛋白濃度），注射后半小時(shí)內(nèi)動(dòng)物不應(yīng)有明顯異常反應(yīng)，觀察7天，動(dòng)物均健存，每只體重增加者判為合格。如不符合上述要求，用4只豚鼠復(fù)度，判定標(biāo)準(zhǔn)同前。

2.6.2　小白鼠試驗(yàn)

用體重18～20g小白鼠5只，每只腹腔注射檢品0.5ml（約1%蛋白濃度），半小時(shí)內(nèi)動(dòng)物不應(yīng)有明顯的異常反應(yīng)，繼續(xù)觀察7天，動(dòng)物均健存，每只體重增加者判為合格。如不符合上術(shù)要求，用10只小白鼠復(fù)試一次，判定標(biāo)準(zhǔn)同前。

2.7　熱原質(zhì)試驗(yàn)

按《生物制品熱原質(zhì)試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。注射劑量按家兔每kg體重注射30mg纖維蛋白原。判定標(biāo)準(zhǔn)按該規(guī)程4.2項(xiàng)要求進(jìn)行。

2.8　HBsAg檢測(cè)

用敏感性為1ng/ml以下的試劑盒檢測(cè)，應(yīng)為陰性。

2.9　抗HCV檢測(cè)

用敏感的方法檢測(cè)，應(yīng)為陰性

2.10　抗HIV—1及2檢測(cè)

用敏感方法檢測(cè)，應(yīng)為陰性。

2.11　鑒別試驗(yàn)

用免疫雙擴(kuò)散法，僅與抗人的血清產(chǎn)生沉淀線，與抗馬、抗牛血清不產(chǎn)生沉淀線。

2.12　根據(jù)病毒滅活方法，必要時(shí)增加相應(yīng)的檢查項(xiàng)目。

3　保存與效期

保存于10℃以下干燥處，效期自血漿投產(chǎn)之日起若成品水分含量低于3%者為5年；成品水分含量為2%～5%者為2年。