《中國生物制品規(guī)程》 人胎盤血白蛋白制造及檢定規(guī)程

本品系由健康人胎盤血液經(jīng)鹽析、辛酸鈉處理的方法或衛(wèi)生部批準(zhǔn)的其他適宜方法提取，經(jīng)60℃10小時(shí)加溫滅活病毒素制成。白蛋白含量96%以上，含適宜的穩(wěn)定劑，不含防腐劑和抗生素，專供靜脈輸注。主要用于治療創(chuàng)傷性、失血性休克，嚴(yán)重?zé)齻约暗偷鞍籽Y等。

1　制造

1.1　制造要求

1.1.1　胎盤及血液（包括臍帶和胎盤后血）必須取自健康產(chǎn)婦。凡患傳染性肝炎、惡性腫瘤、免疫缺陷癥、艾滋病、性病（梅毒、淋?。┘凹毙詡魅静∩形椿謴?fù)的產(chǎn)婦分娩之胎盤，以及人工流產(chǎn)、死胎、各種畸形兒之胎盤與血液均不得使用。

1.1.2　胎盤應(yīng)于娩出后立即由接生人員用無菌操作手續(xù)放入無菌容器內(nèi)，并立即冷藏（10℃以下），在收集運(yùn)輸過程中也應(yīng)冷藏。

1.1.3　胎盤血應(yīng)采用敏感性為1ng/ml以下的試劑盒逐只進(jìn)行HBsAg檢查、梅毒檢查、HIV-1、HIV-2抗體和HCV抗體檢查，陰性者方可投入生產(chǎn)，投產(chǎn)之胎盤，自娩出至開始投產(chǎn)一般不應(yīng)超過48小時(shí)（如特殊情況可延長至72小時(shí)）。冰凍胎盤（-15℃以下）應(yīng)在2個(gè)月內(nèi)投產(chǎn)。

1.1.4　制造工作室及各種生產(chǎn)用具必須專用，嚴(yán)禁與其他異種蛋白質(zhì)混用。

1.1.5　在制造過程中應(yīng)采取各種有效措施防止制品污染熱原質(zhì)。如操作室溫度應(yīng)不超過25℃，注意無菌操作，接觸制品的各種用具用前須經(jīng)除熱原質(zhì)處理，用后應(yīng)立即洗凈。

1.1.6生產(chǎn)用水應(yīng)符合飲用標(biāo)準(zhǔn)，直接用于制品的水應(yīng)符合注射用水標(biāo)準(zhǔn)。所用各種化學(xué)藥品應(yīng)符合《中國生物制品主要原材料試行標(biāo)準(zhǔn)》，未納入試行標(biāo)準(zhǔn)者應(yīng)不低于化學(xué)純。硫酸銨也可用粗制品自行加工提純，提純后鐵鹽、重金屬、砷鹽的含量亦應(yīng)達(dá)到上述要求。飽和硫酸銨溶液的比重在20℃時(shí)為1.245。

1.2　制造工藝

1.2.1　采用硫酸銨鹽析、酸沉淀以及辛酸鈉保護(hù)下的熱處理等步驟，自胎盤浸液中提取白蛋白，并結(jié)合適宜的吸附劑吸附，或低溫乙醇分段沉淀等處理步驟進(jìn)一步提純。亦可用衛(wèi)生部批準(zhǔn)的其他適宜方法。應(yīng)含適量的穩(wěn)定劑（每g蛋白質(zhì)加0.16mmol辛酸鈉或0.08mmol辛酸鈉和0.08mmol乙酰色氨酸鈉）。

1.2.2　熱處理

每批制品經(jīng)60±0.5℃加溫10小時(shí)處理。熱處理可在除菌過濾前或分裝后24小時(shí)內(nèi)進(jìn)行。

1.2.3　分批

同一制造工藝、同一容器混合的制品作為一批。不同濾器除菌過濾或不同機(jī)柜凍干的制品應(yīng)分為亞批。

1.2.4　半成品檢定

液體制劑于除菌過濾后應(yīng)做理化檢查及熱原質(zhì)試驗(yàn)，并應(yīng)按亞批抽樣做無菌試驗(yàn)。

1.2.5　凍干

除菌過濾后，制品應(yīng)及時(shí)分裝、旋凍，并按《人血白蛋白制造及檢定規(guī)程》1.2.5項(xiàng)規(guī)定進(jìn)行凍干。

1.3　劑型與規(guī)格

1.3.1　劑型分為液體及凍干兩種。

1.3.2　規(guī)格

液體制劑蛋白質(zhì)濃度可分為5%、10%、20%或25%四種，每瓶蛋白質(zhì)裝量為2g，5g及10g。凍干制劑每瓶蛋白質(zhì)裝量為5g和10g。

1.4　制品重濾和再制

1.4.1　無菌試驗(yàn)不合格，無肉眼可見混濁或沉淀，可立即再除菌過濾一次。

1.4.2　理化檢查或熱原質(zhì)試驗(yàn)及豚鼠離體回腸收縮試驗(yàn)不符合規(guī)定的制品，允許用適當(dāng)方法加工再制一次。

1.4.3　經(jīng)過重濾或再制的制品均應(yīng)重新進(jìn)行檢定，并根據(jù)不同的再制方法，可增加必要的質(zhì)量檢查項(xiàng)目。

1.4.4　再制品的效期應(yīng)按混合的各批中最早一批的效期計(jì)算。

1.5液體制劑分裝后，應(yīng)放置20～35℃至少14天逐瓶檢查，應(yīng)符合外觀規(guī)定。

2　成品檢定

2.1　抽樣

每批成品應(yīng)抽樣做全面質(zhì)量檢定，不同機(jī)柜凍干的制品應(yīng)分別抽樣做無菌試驗(yàn)及水分測定。

2.2　物理檢查

2.2.1　外觀

凍干制劑應(yīng)為灰白色疏松體，無融化跡象。液體制劑和凍干制劑重溶后應(yīng)為略粘稠，黃色或黃褐色澄明液體，不應(yīng)有異物、混濁或沉淀。

2.2.2　真空度

凍干制劑以高頻火花真空測定器檢測，瓶內(nèi)應(yīng)出現(xiàn)藍(lán)紫色輝光。

2.2.3　溶解時(shí)間

凍干制劑溶解成10%（g　/ml）蛋白質(zhì)濃度時(shí)，其溶解時(shí)間不應(yīng)超過15分鐘。

2.2.4　熱穩(wěn)定性試驗(yàn)（液體制劑）

取檢品一瓶（支），放入57±0.5℃水浴保溫50小時(shí)后，與同批未保溫的另一瓶（支）檢品比較，除顏色有輕微變化外，應(yīng)無肉眼可見的變化。

2.3　化學(xué)檢定

按《生物制品化學(xué)檢定規(guī)程》進(jìn)行。

2.3.1　水分

冰干制劑水分含量應(yīng)≤1%（g/g）。

2.3.2pH值

以生理鹽水稀釋成1%蛋白質(zhì)濃度，在20±2℃測定，pH值應(yīng)為6.4～7.4。

2.3.3　蛋白質(zhì)含量

用鎢酸沉淀法測定。蛋白質(zhì)含量應(yīng)不低于標(biāo)示量的95%。每瓶蛋白質(zhì)的總量應(yīng)不低于出品規(guī)格。

2.3.4純度

白蛋白含量應(yīng)不低于蛋白質(zhì)總量的96%。

2.3.5　殘余硫酸銨含量

若末次沉淀系采用硫酸銨鹽析的制品，殘余硫酸銨含量應(yīng)不超過0.05%(g/ml)。

2.3.6　鈉離子測定

鈉離子含量應(yīng)≤160mmol/L。

2.3.7　鋁離子測定

如用氫氧化鋁吸附處理的制品，其殘余鋁離子含量應(yīng)≤50μg/g蛋白質(zhì)。

2.3.8鉀離子測定

鉀離子含量應(yīng)≤160mmol/L。

2.3.9　吸收度測定

1%蛋白質(zhì)溶液在1cm比色池403nm波長下測定吸收收度，應(yīng)≤0.15。

2.3.10　多聚體含量

多聚體含量應(yīng)≤5%。

2.3.11　辛酸鈉含量

辛酸鈉含量應(yīng)≤0.18mmol/g蛋白質(zhì)。

2.4HBsAg測定

用敏感性為1ng/ml以下的試劑盒測定，應(yīng)為陰性。

2.5鑒別試驗(yàn)

用免疫雙擴(kuò)散法。僅與抗人的血清產(chǎn)生沉淀線，與抗馬、抗牛的血清不產(chǎn)生沉淀線。

2.6　無菌試驗(yàn)

按《生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行

2.7　安全試驗(yàn)

2.7.1　豚鼠試驗(yàn)

取體重300～400g健康豚鼠2只，每只皮下注射檢品5ml，注射后半小時(shí)內(nèi)動(dòng)物不應(yīng)有明顯的異常反應(yīng)，觀察7天，動(dòng)物均應(yīng)健存，每只體重增加，無局部膿腫、壞死或結(jié)痂者，判為合格。體重不增加時(shí)，可繼續(xù)觀察7天。體重上升，無上述局部反應(yīng)時(shí)可判為合格。如不符合上述要求，用4只豚鼠復(fù)試一次，判定標(biāo)準(zhǔn)同前。

2.7.2小白鼠試驗(yàn)

取體重18～20g小白鼠5只，每只腹腔注射檢品0.5ml，半小時(shí)內(nèi)動(dòng)物不應(yīng)有明顯的異常反應(yīng)，繼續(xù)觀察7天，動(dòng)物均健存，每只體重增加者判為合格。如不符合上述要求，用10只小白鼠復(fù)試一次，判定標(biāo)準(zhǔn)同前。

2.8　熱原質(zhì)試驗(yàn)

按《生物制品熱原質(zhì)試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。注射劑量按家兔體重注射0.75g/kg。判定標(biāo)準(zhǔn)按該規(guī)程4.2項(xiàng)要求進(jìn)行。

2.9　豚鼠離體回腸收縮試驗(yàn)

取體重350～500g健康豚鼠解剖，取出回腸，剪下約3～4cm腸段。浸沉于臺(tái)氏液中，供給空氣，保持水恒溫（±0.5℃，水浴溫度可在30～36℃之間任選一個(gè)溫度），待穩(wěn)定后，先用陽性、陰性對照樣品檢查腸段的敏感度，陽性對照應(yīng)使腸段收縮峰高約1cm。然后注入檢品（檢品中所含的蛋白質(zhì)mg數(shù)與臺(tái)氏液容積ml數(shù)比值為1∶1～2∶1），觀察1～2分鐘，以2只豚鼠的各一個(gè)腸段的反應(yīng)與陰性對照相同者為合格。如兩只豚鼠的腸段中有一個(gè)有反應(yīng)，可另取一只豚鼠的腸段進(jìn)行檢查，陰性者為合格，否則判為不合格。

3　保存與效期

液體制劑保存于2～8℃暗處，凍干制劑應(yīng)嚴(yán)格保存于10℃以下避光干燥處。自浸漬胎盤之日起效期為5年。