《中國幽門螺桿菌研究》 5　分子生物學方法

多聚酶鏈反應　多聚酶鏈反應（Poly-merasechain reaction，PCR）實際上是一種核酸片段體外擴增試驗。做這一試驗的先決條件是首先必須弄清楚某一基因的核苷酸序列然后人工合成其中兩個特異性處段（其長度以15—30個堿基為宜，不宜過短或過長）作為引物，在PCR儀中經過30—50個溫度循環(huán)擴增其核酸片段，使其呈幾何級數長，然后取其產生或其酶切片段在瓊脂糖上跑電泳，即可判斷所得產物是否即企望的基因產物。目前亦已可用這一反應來測知標本中有無Hp的存在，甚至還可進一步用核苷酸序列分析或特異性探針加以鑒定。關于Hp的PCR根據所選引物的不同已經有許多種，已知的這些引特主要來自Hp的尿素酶基因（UreA，UreB，UreC，UreD），16SrRNA和編碼26KDa蛋白質的核苷酸序列，縱觀不同學者所選用的引物，現在都能特異地以Hp有關基因作模板，擴增出部分核苷酸序列，而不引導擴增了其他細菌核苷酸序列。因此對Hp檢測的特異性和敏感性均較高，目前已開始用于各種臨床標本（活檢、胃液、牙菌斑等）的檢測和某些動物胃標本的檢測，有人還用PCR擴增后所得的DNA產物，以核酸內切作指紋圖譜分析，用于Hp的流行病學研究。隨著PCR的發(fā)展，Williums等在這一基礎上又發(fā)展出了RAPD（Randmoamplified polymorphic DNA）技術或稱AP(arbitrary primer)—PCR。它的原理是采用隨機選出的單一核苷酸鏈為引物以靶DNA模板在多個部位引導擴增DNA。經過RADP技術處理的結果可顯示出不同Hp株的特異性。因此亦有人把此方法用于Hp的流行病學研究上。隨著分子生物學技術的不斷發(fā)展，PCR技術的應用在Hp的研究中很有前途，它反應快，標本運輸條件要求不高，甚至可以郵寄，可是PCR的高敏感性也可能是它致命的弱點：使用試劑的濃度，操作的溫度，過度的擴增，極少DNA的污染等都可導致假陽性，因此嚴格控制件，合理選擇DNA擴增循環(huán)次數，謹防污染仔細設置對照等都是不可忽視的因素。

總之，Hp感染有許多方法檢查，最簡便的，成本最低廉的，僅有極小侵襲性的是血清學方法?？墒牵鍖W陽性只能說曾感染過或現在正在感染，13C(20)和15N(21)同位素示蹤方法是完全無損傷性的，且能檢測即時使整個胃的感染情況。因此是比較理想的?？墒怯捎谑茉O備限制，費用較貴難于普遍推廣，14C同位素示蹤法雖然大醫(yī)院有條件可做，價格比13C，15N便宜，但有放射性損害，內窺鏡檢查取活檢標本是侵襲性的，可作微生物學的直接檢查，同時可以觀察組織學變化，亦可為分子生物學檢查提供材料，若欲簡單一些，可以只做快速尿素酶試驗，最后，從活檢標本分離培養(yǎng)Hp，雖然因驗一些，但對選擇合適的抗Hp治療方案是必備條件。