《中國(guó)幽門螺桿菌研究》 2 結(jié)果

2.1 尿素酶快速診斷 Hp能產(chǎn)生大量的尿素酶，分解尿素產(chǎn)生氨，使pH值升高，據(jù)此將尿素酶液全培養(yǎng)基顏色由桔黃色變?yōu)榉奂t色的反應(yīng)定為陽(yáng)性反應(yīng)。試驗(yàn)結(jié)果如表1所示：

表 1 不同時(shí)間尿素酶快診結(jié)果

時(shí)間（h）受檢標(biāo)本數(shù)合計(jì)陽(yáng)性率（%）陽(yáng)性陰性4165135300552418611430062

從表中看出，4h和24h尿素酶快診的陽(yáng)性率分別為55%和62%。在300份胃病患者的胃粘膜Hp培養(yǎng)中，有195例為陽(yáng)性。陽(yáng)性率為65%，與4h尿素酶快診陽(yáng)性率之間無(wú)顯著性差異，（P＞0.05）。尿素酶快診陽(yáng)性結(jié)果與Hp培養(yǎng)陽(yáng)性結(jié)果之間的對(duì)應(yīng)關(guān)系良好，培養(yǎng)出的195例Hp菌株作尿素酶快診，在1min內(nèi)均呈陽(yáng)性反應(yīng)，特異性達(dá)100%。而4h和24h尿素酶快診的敏感性分別為84.6%(165/195)。因此用尿素酶作Hp快診，在早期及Hp培養(yǎng)后進(jìn)行，均有其非常特異而重要的意義。

2.2 直接涂片鏡檢 對(duì)其中21例作了直接涂片鏡檢，結(jié)果有4例鏡下可見(jiàn)成簇Hp（+++）占19.0%；有1例鏡下易找到Hp（++），占4.8%；有9例鏡下可見(jiàn)Hp零星存在（+），占42.9%；6例鏡檢為陰性。鏡檢陽(yáng)性率為66.7%。21例Hp 培養(yǎng)陽(yáng)性為16份，陽(yáng)性率為76.2%，與鏡檢陽(yáng)性率之間無(wú)顯著差異（P＞0.05）。鏡檢陽(yáng)性符合率為87.5%(14/16)。

2.3 Hp的運(yùn)送、培養(yǎng)及生化反應(yīng)

2.3.1 運(yùn)送Hp生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)條件很高，而從采樣到分離培養(yǎng)需要一段時(shí)間，送檢中保存問(wèn)題當(dāng)然重要，有文獻(xiàn)報(bào)道將胃粘膜標(biāo)本浸在20%葡萄糖液體內(nèi)送檢，5h之內(nèi)不會(huì)影響陽(yáng)性率。為了探索一條保存時(shí)間長(zhǎng)、效果好的方法，我們?cè)囉煤?0%小牛血清的布氏肉湯作標(biāo)本保存液，4°C冰箱保存，用冰壺送檢，隨機(jī)對(duì)300例胃粘膜標(biāo)本進(jìn)行了不同時(shí)間的分離培養(yǎng)，所用平皿是新配制或在密閉條件下保存?zhèn)溆玫模鲳B(yǎng)結(jié)果是保存1～8h的標(biāo)本陽(yáng)性率為47.5%～78.6%，有1例標(biāo)本不保存液中存放了17d后Hp培養(yǎng)仍陽(yáng)性。

2.3.2 培養(yǎng)300例胃粘膜標(biāo)本，培養(yǎng)Hp結(jié)果有195份陽(yáng)性，陽(yáng)性率為65.0%。菌落形態(tài)：37°C微氧條件下培養(yǎng)72h后，可見(jiàn)0.5～1mm直徑大小、圓形、扁平、濕潤(rùn)、半透明的灰白色菌落，偶爾可見(jiàn)菌落周圍有β微溶血現(xiàn)象。菌體形態(tài)：顯微鏡下菌體呈弧型、S型或海鷗展翅狀，與空腸彎曲菌相類似。72h鏡檢菌體呈弧形或彎曲狀，比空腸彎曲菌要大，著色較好。五日以上菌體呈多形狀，有直桿形、微彎曲型或球形，著色不均勻。

2.3.3 生化反應(yīng) Hp的氧化酶、過(guò)氧化酶、尿素酶均為陽(yáng)性反應(yīng)。其中尿素酶反應(yīng)的時(shí)間與細(xì)菌濃度成反比。葡萄糖發(fā)酵、硝酸鹽還原、及3.5%NaCl反應(yīng)均為陰性。馬尿酸水解反應(yīng)84.1%為陰性，15.9%為弱陽(yáng)性。1%甘氨酸反應(yīng)87.0%為陽(yáng)性。0.04%2、3、5TTC反應(yīng)8.6%為陽(yáng)性。

2.4 藥敏試驗(yàn) 選取22株生長(zhǎng)良好的Hp菌作藥敏試驗(yàn),結(jié)果如表2所示.從表中可以看出：Hp對(duì)鏈霉素、四環(huán)素、氯霉素、先鋒霉素、利福平、卡那霉素、紅霉素、新霉素及大霉素較為敏感。而對(duì)復(fù)方新諾明、萘啶酮酸和多粘菌素B有耐受作用。另外，選用8株Hp對(duì)中醫(yī)研究院研制的五種中藥即Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ號(hào)及胃丹C進(jìn)行了藥敏試驗(yàn)，結(jié)果表明作用減弱，抑菌環(huán)直徑分別為16～20mm，20mm，10～20mm，0mm及10～14mm。

表2 22株Hp的藥敏試驗(yàn)結(jié)果

抗生素藥敏片藥量（μg）敏感菌株數(shù)抑菌環(huán)直徑范圍平均直徑（mm）新霉素3021（95.5）16～2824.4慶大霉素1021(95.5)14～3822.3四環(huán)素3022(100.0)26～3633.8磺胺嘧啶30022(100.0)1010.0紅霉素302(9.1)22～4025.4痢特靈30020(90.9)10～4017.9氯霉素3019(86.4)24～3828.6青霉素G1022(100.0)12～3020.8呋喃坦丁30020(90.9)12～5021.9卡那霉素3021(95.5)12～2825.3萘啶酮酸301(4.5)88.0先鋒霉素3020(90.9)12～3426.5復(fù)方新諾明250(0.0)0.0鏈霉素1022(100.0)16～4032.3氨芐青霉素103(13.6)12～1412.7利福平520(90.9)18～3228.9多粘菌素B300IU1(4.5)1616.0黃連素10021(95.5)8～2415.6托布霉素1021(95.5)10～3021.9丁胺卡那霉素1021(95.5)12～2823.5

注：( )內(nèi)敏感百分比

2.5 殺菌桿菌抗體 對(duì)40份受檢胃病患者的血清進(jìn)行了殺Hp抗體的檢測(cè)試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表3。根據(jù)診斷標(biāo)準(zhǔn) ，殺Hp抗體滴度≥1:160時(shí)為陽(yáng)性，則殺Hp抗體檢測(cè)試驗(yàn)的實(shí)際陽(yáng)性率為57.5%。對(duì)應(yīng)40份患者胃粘膜標(biāo)本Hp培養(yǎng)陽(yáng)性者為29份，陽(yáng)性率為72.5%，與殺Hp抗體試驗(yàn)的陽(yáng)性率之間無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

2.6 動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果 ①尿素酶快診僅BALb/c小鼠呈陽(yáng)性反應(yīng)，其他小鼠均為陰性。而正常BALb/c小鼠胃粘膜的尿素酶快診也偶爾呈陽(yáng)性反應(yīng)，因此推測(cè)尿素酶陽(yáng)性者不一定是Hp感染，由何引起有待進(jìn)一步研究。②Hp培養(yǎng)均為陰性。③尿素本科陽(yáng)性的BALb/c小鼠的胃粘膜病理組織切片檢查，可見(jiàn)粘膜上皮中有嗜酸性染色的桿菌存在，在大量白細(xì)胞，偶爾可見(jiàn)形態(tài)類似螺桿菌的細(xì)菌的存在。

表3 殺幽門螺桿菌抗體試驗(yàn)結(jié)果

稀釋度1:101:20～1:801:160～1:6401:1280～1:5120合計(jì)