《中國(guó)幽門螺桿菌研究》 1 材料和方法

1.1 材料 各型胃病患者共200例。年齡19歲～80歲，平均46.9歲。男222例，女78例?；颊呓?jīng)胃鏡檢查時(shí)，均在胃竇部或求部鉗取粘膜組織兩塊，置于含10%滅活小牛血清的布氏肉湯中放于4°C冰箱中保存，送檢。

1.2 方法

1.2.1 尿素試驗(yàn) 參考Christtensen尿素肉湯培養(yǎng)和mlorris等快速診斷法,先用2%液體尿素常規(guī)法,后用10%液體尿素1min檢查法及5%尿素濾紙片法,進(jìn)行了對(duì)比研究。

1.2.2 直接涂片鏡檢 用保存液將胃粘膜研磨成勻漿后，取一滴推成涂片，甲醇固定后用0.3%堿性復(fù)紅單染，于顯微鏡下直接檢查。

1.2.3 幽門螺桿菌培養(yǎng) 以布氏瓊脂培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，加入6%脫纖維新鮮羊血及聯(lián)合抗生素（TmP5mg/L、萬(wàn)古霉素6mg/L、兩性霉素2mg/L），制成血平皿，放置4°C冰箱中保存、備用。從送檢的Hp保存液中用白金耳取出胃粘膜組織塊放入玻璃研磨器中，加入0.5ml保存液，研磨成勻漿，用1ml吸管吸取0.2ml于血平皿中涂勻，將平皿置于10%CO2，5%O2及85%N2混合氣體培養(yǎng)箱中，37°C培養(yǎng)72h后觀察培養(yǎng)結(jié)果。剩下 液體勻漿于尿素酶快診及直接涂片鏡檢。

1.2.4 藥敏試驗(yàn) 抗菌藥物敏感試驗(yàn)所用試紙系參考WHO建議的藥敏試驗(yàn)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)及國(guó)內(nèi)外有關(guān)資料制備而成，由大連生物試劑廠生產(chǎn)，專供用紙片擴(kuò)散法來(lái)檢測(cè)細(xì)菌對(duì)抗菌藥物的敏感度。試驗(yàn)中所用菌液為用0.1%胨生理鹽水洗下的37°C48h培養(yǎng)物，濃度為2×109cfu/ml。用1ml吸管取0.1ml菌液于血平皿上，涂勻，之后將藥敏片按適當(dāng)?shù)拈g距平貼于平皿上，一般9m直徑的平皿上貼6張藥敏片。最后將平皿置于混合氣體培養(yǎng)箱中37°C培養(yǎng)48～72h，觀察試驗(yàn)結(jié)果，測(cè)量抑菌環(huán)直徑。

1.2.5 殺螺桿菌抗體檢測(cè) 原理：氧化酶反應(yīng)陽(yáng)性的細(xì)菌，由于氧化酶的作用，可使TTC用滅菌蒸餾水配成0.5%的溶液；指示菌用Hp295 37°C48h的培養(yǎng)物，其濃度為107cfu/ml；補(bǔ)體一指示菌懸液的制備：補(bǔ)體取4只豚鼠的新鮮分離血清，用生理鹽水作1:20稀釋，再加入最終濃度為1%（V/V）的指示菌，即為濃度相當(dāng)于105cfu/ml的補(bǔ)體—指示菌懸液；微量定量板用4×10孔板。方法：①每孔先加入0.1ml生理鹽水。②第一孔加入1:5被檢滅活血清（取自胃病患者）0.1ml，之后順序作從1:10～1:5120的對(duì)倍稀釋。③每孔加補(bǔ)體—指示菌懸浮液一滴，約0.05ml。④最后每孔加入含0.01%TTC布氏肉湯0.1ml（0.5%TTC用布氏肉湯作50倍釋稀?；旌虾笊w上塑料蓋，于37°C培養(yǎng)20～24h后觀察結(jié)果。以無(wú)紅色出現(xiàn)的孔內(nèi)的血清稀釋度作為被檢血清的殺螺桿菌抗體的最高滴度。

1.2.6 動(dòng)物試驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)選用小鼠C57、BALb/c和金黃色地鼠（由本所動(dòng)物室提供）用布氏肉湯將新培養(yǎng)的Hp菌洗下，濃度大約配成2×109cfu/ml，每只小鼠一次灌胃約0.5～1ml菌液，每周2次，共4次～6次，末次灌胃后3～7d，處死動(dòng)物，解剖后取兩塊胃粘膜組織作尿素酶快診和Hp菌培養(yǎng)及組織切片。

1.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用X2檢驗(yàn)。