《醫(yī)學微生物學》 二、基因突變類型

在明確了細菌培養(yǎng)環(huán)境條件僅起選擇作用后，學者們采用了一些選擇方法以獲得突變株，這些突變株的應用對研究遺傳變異及開展有基因工程都很有幫助。大從數(shù)利用的突變型均為大腸桿菌或鼠傷寒沙門氏菌，因這兩種細菌營養(yǎng)要求不高，僅需鹽、微量金屬離子及有限的氮、碳來源即可生長繁殖。未發(fā)生突變的菌株稱為野生型，而發(fā)生突變的菌株則根據選擇條件可分為：

1．營養(yǎng)缺陷型：突變后因某種酶的缺失需要額外添加某種營養(yǎng)成份方能生長繁殖者。一般用“+”代表能利用自然存在的某種成份或能合成某種成份的中間體，而“—代表不能合成該成份的菌株。如his-則代表組氨酸缺陷型，需在培養(yǎng)基中加入組氨酸。

2.抗性突變型:一般以S代表對化學藥物或抗生素敏感,r代表有抵抗力。如str8代表該菌株對鏈霉素敏感，在有鏈霉素存在時不能生長。這類突變型最易獲得，應用亦廣。

3．發(fā)酵陰性突變型：突變后失去發(fā)酵某種糖的能力但仍能利用其他糖做為碳源。這是由于突變后失去能分解該糖的酶。由于乳糖發(fā)酵可用指示劑根據pH改變而顯示，故可Lac-（乳糖發(fā)酵陰性）突變株作為研究工具。

圖5－2　細菌影印培養(yǎng)試驗

1．從普通培養(yǎng)基上將皿上長的細菌，用絲絨影印至含鏈霉素培養(yǎng)基上，耐菌細菌不多。2．從不接觸鏈霉素的平皿上，按影印顯示耐鏈霉素菌落區(qū)挑取細菌增菌。3．將102細菌接種普通培養(yǎng)基上再作影印，再按耐鏈霉素平皿上相應菌落處接種增菌。4．未接觸鏈霉素的平皿上，全部細菌均耐鏈霉素。

4．條件致死性突變型：在某一條件下具有致死效應，突變株不能生長，但在另一沒有致死效應的條件下仍可生長。最常用者為溫度敏感性突變型。它們在親代能生長的溫度范圍內特別是較高濕度（42℃）不能生長，但在較低溫度（25℃）則能生長。這種菌株稱為ts株。其發(fā)生的原因是某些酶的肽鏈結構發(fā)生改變后，降低了酶的抗熱性。因此在較高溫度下不能生存。這種用溫度篩選突變株的方法比較簡便，應用較多。