《細(xì)胞和分子免疫學(xué)》 （二）CD8陽(yáng)性細(xì)胞群

根據(jù)CD28陽(yáng)性或陰性可將CD8+細(xì)胞分為細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CD8+CD28+）和抑制性T細(xì)胞（CD28+CD28-）。CD28McAb能與60-80%T細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)，包括全部CD4細(xì)胞和部分CD8細(xì)胞。

1.Tc(CTL)　在人類CTL表型為CD3+CD4-8+CD28+。小鼠CTL表型為Thy-1+、Lyt-1+、Lyt-2+/Lyt-3+。

（1）CTL的分化：靜止的CTL以前體細(xì)胞（precursor）(CTL-P)形式存在，外來抗原進(jìn)入機(jī)體被抗原提呈細(xì)胞（APC）加工處理，形成外來抗原與APC自身MHc I類抗原的復(fù)合物，被相應(yīng)CTL克隆細(xì)胞膜表面TCR/CD3所識(shí)別，抗原刺激信號(hào)和APC釋放IL-1共同存在的條件下，CTL-p被活化，并表達(dá)IL-2R、IL-4R、IL-6R等多種細(xì)胞因子受體，在IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ等細(xì)胞因子誘導(dǎo)下，迅速增殖，并分化為成熟的效應(yīng)殺傷性T細(xì)胞（effector CTL）。CTL具有識(shí)別抗原的特異性，即能殺傷具有特定的外來抗原（如病毒感染靶細(xì)胞膜表面的病毒抗原）與自身MHc I類抗原結(jié)合的復(fù)合物的靶細(xì)胞。有關(guān)CTL殺傷靶細(xì)胞受到MHC I類抗原的限制，參見第五章“主要組織相容性復(fù)合體”第四節(jié)。從腫瘤組織周圍分離獲得的CTL稱為腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞（tumor infiltrating lymphocyte , TIL）。TIL在體外加IL-2培養(yǎng)后，具有很高的殺傷腫瘤作用，目前已用于臨床的腫瘤治療。

（2）CTL的識(shí)別機(jī)制：多種粘附分子參與CTL對(duì)靶細(xì)胞的識(shí)別和粘附，主要有：①LFA-1/ICAM-1、ICAM-2、ICAM-3，可溶性ICAM-1（sICAM-1）可抑制CTL殺傷腫瘤細(xì)胞；②CD2/LFA-3（CD58），抗CD2McAb或抗CD58McAb均可抑制CTL效應(yīng)細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的殺傷；③CD8/MHcI類抗原的非多態(tài)性結(jié)構(gòu)域。

（3）CTL的殺傷機(jī)制：TCL殺傷靶細(xì)胞的機(jī)理目前認(rèn)為主要通過釋放多種的介質(zhì)和因子介導(dǎo)的。

①穿孔素（perforin）:又稱成孔蛋白（pore-foming protein,PFP）、C9相關(guān)蛋白（C9 related protein）或溶細(xì)胞素（cytolysin），貯存于電子稠密胞漿顆粒（electron-densecytoplasmic granules），成熟的穿孔素分子由534個(gè)氨基酸殘基組成，分子量為56-75kDa，IP為6.4，穿孔素分子中央部位170-390之間的氨基酸序列與C9328-560氨酸酸序列約有20%同源性，這個(gè)區(qū)域與穿孔素和C9的多聚化和以管狀形式插入到細(xì)胞膜有關(guān)。在殺傷相時(shí)，CTL細(xì)胞脫顆粒，穿孔素從顆粒中釋放，在Ca2+存在下，插入靶細(xì)胞膜上，并多聚化形成管狀的多聚穿孔素（polyperforin），約含12-16個(gè)穿孔素分子，分子量可達(dá)1000kDa。多聚穿孔素在靶細(xì)胞膜上形成穿膜的管狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)徑平均16nm。這種異常的通道使Na+、水分進(jìn)入靶細(xì)胞內(nèi)，K+及大分子物質(zhì)（如蛋白質(zhì)）從靶細(xì)胞內(nèi)流出，改變細(xì)胞滲透壓，最終導(dǎo)致細(xì)胞溶解。此過程與補(bǔ)體介導(dǎo)的溶細(xì)胞過程類似，溶解細(xì)胞過程比較迅速。CTL本身可能釋放A型硫酸軟骨素蛋白聚糖（proteoglycans of chondroitinsulphate A type）、硫酸軟骨素A限制因子（homologous restriction factor,HRF），因此可避免穿孔素對(duì)CTL自身細(xì)胞的攻擊。

圖7-3 CTL釋放穿孔素殺傷靶細(xì)胞機(jī)理示意圖

②絲氨酸酯酶（serine estersse）:活化CTL釋放多種絲氨酸酯酶，如CTLA-1（又稱CCP1或granzyme B）、CTLA-3（又稱H因子或granzyme A），其作用可能類似補(bǔ)體激活過程中的酯酶作用，通過活化穿孔素而促進(jìn)殺傷作用。

③淋巴毒素（lymphotoxin,LT）:又稱腫瘤壞死因子-β（TNF-β），LT可直接殺傷靶細(xì)胞，但殺傷過程較慢，其殺傷機(jī)理參見第四章“細(xì)胞因子及其受體”第二節(jié)中腫瘤壞死因子。

2.Ts和Ts亞群　抑制性T細(xì)胞（suppressor T lymphocyte,Ts）對(duì)免疫應(yīng)答有重要的負(fù)調(diào)節(jié)功能，抑制性T細(xì)胞功能的異常，常與T自身免疫性疾病、第I型超敏反應(yīng)等疾病發(fā)生有關(guān)。

（1）抑制性T細(xì)胞的證實(shí)：綿羊紅細(xì)胞（sheep red blood cell , SRBC）對(duì)于小鼠是良好的免疫原，合適劑量的SRBC可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生高效價(jià)的抗SRBC抗體。當(dāng)過高劑量SRBC免疫小鼠時(shí)，則抗體合成水平反而明顯下降，稱為高劑量免疫耐受。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，將高劑量免疫耐受小鼠脾細(xì)胞轉(zhuǎn)移到免疫原劑量刺激的小鼠體內(nèi)時(shí)，則小鼠抗體應(yīng)答水平明顯下降。如高劑量免疫耐受小鼠脾細(xì)胞經(jīng)抗Thy-1和補(bǔ)體處理后再轉(zhuǎn)移到免疫原劑量免疫的小鼠體內(nèi)，則高劑量免疫耐受小鼠脾細(xì)胞的抑制作用消失。實(shí)驗(yàn)證明了在高劑量免疫耐受小鼠的脾細(xì)胞中存在有抑制作用的T細(xì)胞。

表7-9 抑制性T細(xì)胞的證實(shí)

（1）免疫原劑量---→抗體應(yīng)答+++SRBS免疫小鼠（2）高劑量SRBC---------------------------------→抗體應(yīng)答+免疫耐受小鼠（3）高劑量免疫-→轉(zhuǎn)移未處理脾細(xì)胞-→免疫原劑量-→抗體應(yīng)答+耐受小鼠　免疫小鼠（4）高劑量免疫-→轉(zhuǎn)移抗Thy-1+ ----→免疫原劑量-→抗體應(yīng)答+++耐受小鼠　補(bǔ)體處理脾細(xì)胞　免疫小鼠

進(jìn)一步研究證明，這種抑制細(xì)胞的表型為CD3+CD4-CD8+（小鼠CD8單抗常用Lyt-2）。人的抑制性T細(xì)胞表型為CD3+CD4-CD8+CD28-。Ts細(xì)胞不僅對(duì)B細(xì)胞合成和分泌抗體有抑制作用，而且對(duì)Th輔助作用、遲發(fā)型超敏反應(yīng)以及Tc介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用都有負(fù)調(diào)節(jié)作用。

(2)Ts細(xì)胞的亞群：Ts細(xì)胞還可分為Ts1、Ts2和Ts3不同亞群，分別起著誘導(dǎo)抑制、轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制和發(fā)揮抑制效應(yīng)的作用。它們之間相互作用的確切機(jī)理還不十分清楚，可能是通過釋放可溶性介質(zhì)相互作用的。Ts1（Tsi，抗原特異性抑制性T細(xì)胞）分泌TsF1（TsiF，抑制誘導(dǎo)因子）→作用于Ts2（Tst，抑制轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞），分泌TsF2（Tst F）→作用于Ts3（Tse，抑制效應(yīng)細(xì)胞），分泌Ts3F（TseF），作用于Th細(xì)胞，通過對(duì)Th的抑制作用，從而對(duì)各種免疫功能起負(fù)調(diào)節(jié)作用。Ts細(xì)胞群具有高度異質(zhì)性，除Ts1、Ts2、Ts3亞群外，還有一群反抑制性T細(xì)胞亞群（contra-suppressor T cel，Tcsl）。Tcs活化后分泌反抑制性T細(xì)胞因子TcsF，直接作用于Th細(xì)胞，解除Ts細(xì)胞的抑制作用，使Th細(xì)胞恢復(fù)輔助活性。