《細(xì)胞和分子免疫學(xué)》 （一）MHC對(duì)免疫應(yīng)答遺傳控制研究的基本條件

1.人工合成多肽抗原 化學(xué)合成多肽抗原主要有以下兩類(lèi)：

（1）合成分枝多肽抗原：它是以線狀的多聚賴(lài)氨酸（L）聯(lián)上多聚丙氨酸（A）的側(cè)鏈，形成A-L骨架結(jié)構(gòu)，然后再在丙氨酸鏈上偶聯(lián)不同的氨基酸，形成具有不同抗原特異性的分枝多肽抗原。最常用的是（T，G）-A-L，（H，G）-A-L和（φ，G）-A-L等（圖6-14）。抗原特異性由末端氨基酸所決定，側(cè)枝和主干起載體的作用。

圖6-13　MHC與胸腺的選擇作用

（2）線狀多肽抗原：這是幾種氨基酸按不同比例和數(shù)量結(jié)合而成的線狀多肽，具有較強(qiáng)的抗原性，如GLφ等。單種氨基酸組成的均一多肽抗原性很弱，但偶聯(lián)上半抗原后則是很好的免疫原，例如多聚賴(lài)氨酸（PLL）與DNP偶聯(lián)形成的DNP-PLL被廣泛用于豚鼠免疫應(yīng)答遺傳控制的研究。

2.同類(lèi)系小鼠（congenic mice）是遺傳北景完合相同，只是所需研究的那個(gè)基因不同的小鼠。建立同類(lèi)系小鼠是諾貝爾獲得者Snell對(duì)免疫遺傳學(xué)作用出的突出貢獻(xiàn)。有了同類(lèi)系小鼠和人工合成多肽抗原，就可以深入研究免疫應(yīng)答的基因控制以及與MHC的關(guān)系。同類(lèi)系小鼠的培育的方法見(jiàn)圖6-15。

首先近交系（inbredstrain）A品系小鼠與另一個(gè)近交系B品系小鼠進(jìn)行交配，A品系MHC是a/a純合（homozygous）的，B品系MHC是b/b純合的。A與B品系雜交的子一代（F1）全部是a/b雜合狀態(tài)的。然后將F1小鼠與親本A品系進(jìn)行回交（backcross），其子代一半為a/a，另一半為a/b,a/b雜合狀態(tài)小鼠的皮片移植到A品系小鼠后迅速被排斥，而a/a子代小鼠的皮片移植到A品系小鼠后并不迅速被排斥。將通過(guò)皮片移植后發(fā)生迅速排所鑒定的a/b雜合小鼠又與A品系小鼠進(jìn)行回交，其子代一半為a/a，另一半為a/b，再用上述皮片移植排斥反應(yīng)的方法鑒定出a/a或a/b，將a/b雜合不再與A品系小鼠進(jìn)行回交。如此繼續(xù)20代后，a/b雜合小b等位基因仍然保留，但原來(lái)B品系小鼠中其它的遺傳座位都消失了，正如連續(xù)稀釋?zhuān)╯erial dilution）一樣，F(xiàn)1小鼠保留了B品系基因的50%，回交后第一代平均只保留了B品系基因的25%，這樣經(jīng)過(guò)20次回交后除了保留B品系的MHC等位基因（b）以外，其余B品系的基因（非MHC基因）都消失。也就是說(shuō)，經(jīng)過(guò)如此20代回交后a/b小鼠，除了第17號(hào)染色體上的MHC是a/b雜合以外，其余的遺傳背景（除17號(hào)染色體MHC以外和其余39對(duì)染色體）均與A品系相同。將經(jīng)過(guò)20代回交的a/b小鼠進(jìn)行品種間雜交（interbreed）或稱(chēng)史妹交配，其子代的MHC基因25%是a/a純合，25%是b/b純合，50%是a/b雜合的。其中b/b純合小鼠皮片移植的A品系小鼠后即發(fā)生迅速的排斥。用b/b純合小鼠進(jìn)行品種間雜交，培育出一個(gè)新的品系即MHC基因位點(diǎn)上與B品系相同，而其它所有的遺傳背景與A品系相同，我們可稱(chēng)作這個(gè)品系小鼠與A品系是同類(lèi)系（congenic to strain A）,或者叫做在A遺傳背景的B MHC。常用同類(lèi)系小鼠單體型見(jiàn)表6-7。

圖6-14　合成分枝多肽抗原示意

注：（T，G）-A--L：（多聚酪氨酸，多聚谷氨酸）-多聚丙氨酸-多聚賴(lài)氨酸

（H，G）-A--L：（多聚酪氨酸，多聚谷氨酸）-多聚丙氨酸-多聚賴(lài)氨酸

（φ，G）-A--L：（多聚酪氨酸，多聚谷氨酸）-多聚丙氨酸-多聚賴(lài)氨酸

L：L型，D：D型

3.H-2內(nèi)重組株　通過(guò)不同的同類(lèi)系雜交，根據(jù)交換重組定律，在雜交后代中選擇新的H-2內(nèi)重組體（interH-2recombinants）。不同的重組株在H-2內(nèi)的一些基因位點(diǎn)具有不同的等位基因，即H-2單體型（haplotype）不同。

例如品系A(chǔ)，B10.A單體型為a，它是由H-2k和H-2d兩個(gè)雙親單體型的I-E亞區(qū)和S區(qū)之間發(fā)生交換重組而產(chǎn)生（表6-8）。H-2內(nèi)重組株（舉例）參見(jiàn)表6-9。

表6-7　常用同類(lèi)系小鼠的單體型（標(biāo)準(zhǔn)品系，type strains）

品系單體型KI-ASDB10(C57BL/10)H-2bbbbbB57BL/6H-2bbbbbDBA/2H-2dddddBalb/cH-2dddddB10.D2H-2dddddC3HH-2kkkkkCBAH-2kkkkkB10.BRH-2kkkkk

圖6-15　同類(lèi)系小鼠培育的方法

表6-8　A.B10.AH-2內(nèi)重組株的產(chǎn)生

單體型KI-AI-ESGD親代1kkkkkkk親代2dddddddA.B10·Aakkkddd

表6-9 H-2內(nèi)重組株（舉例）

品系單體型雙親單體型KI區(qū)SGDAEA.B10.Aak/dkkkdddA.ALa1k/dkkkkkdC3H.OLo1d/kdddkkkC3H.OHo2d/kdddddkB10.A(4R)h4a/bkkbbbbB10.AMh5k/bkkkkkbB10.A(3R)i3b/abbkdddB10.A(5R)i5b/abbkdddA.TLt1s/alskkkkdA.Th,B10.S(7R)t2s/asssssdBSVStss/a2sssdddB10.M(17R)ag1s/fkkkddfB10.M(11R)ap1s/ffffffd