白癜風(fēng)噬菌體抗體庫構(gòu)建成功

近日，第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院皮膚科劉玲碩士等在完成的一項(xiàng)國家自然科學(xué)基金資助課題中，采用細(xì)胞內(nèi)PCR擴(kuò)增抗體基因的方法，成功構(gòu)建一庫容量為3×106白癜風(fēng)的噬菌體抗體庫。該抗體庫的建立，為進(jìn)一步研究自身抗體在白癜風(fēng)發(fā)生發(fā)展過程中的作用及其治療提供了嶄新的思路。

據(jù)介紹，白癜風(fēng)是一種常見的皮膚色素脫失性疾病。近年來有研究表明，白癜風(fēng)與自身免疫密切相關(guān)，其患者體內(nèi)存在抗黑素細(xì)胞膜自身抗體，導(dǎo)致黑素細(xì)胞破壞，引起自身損傷。然而，對(duì)于“自身抗體在疾病發(fā)生發(fā)展中究竟是始動(dòng)因素還是繼發(fā)反應(yīng)”這一問題一直存在爭(zhēng)議。

為探討自身抗體機(jī)制的新思路，劉玲等研究人員采用細(xì)胞內(nèi)PCR擴(kuò)增的方法，選擇100例（男48例，女52例，平均年齡21歲，平均病程兩個(gè)月）進(jìn)展期白癜風(fēng)患者血樣，通過PCR1反轉(zhuǎn)錄、擴(kuò)增輕鏈和重鏈可變區(qū)基因、Cre重組酶介導(dǎo)、單個(gè)細(xì)胞內(nèi)輕重連接獲取體內(nèi)原始配對(duì)信息，以及經(jīng)振蕩篩選等系列技術(shù)處理后，成功地構(gòu)建出一庫容量為3×106的白癜風(fēng)噬菌體抗體庫。

該抗體庫經(jīng)抗體表達(dá)、特異性檢測(cè)及吸附篩選等檢驗(yàn)，結(jié)果顯示：細(xì)胞內(nèi)PCR擴(kuò)增ScFv基因，目的條帶為800bp，與預(yù)期大小相符；取20個(gè)單菌落提取質(zhì)粒進(jìn)行凝膠電泳，19個(gè)可見800bp目的條帶，重組率達(dá)95%。通過4輪“親和吸附-洗脫-擴(kuò)增”篩選，特異性噬菌體抗體回收率增加約67倍，并獲得1株特異性針對(duì)黑素細(xì)胞膜抗原的抗體。提示抗體庫具有重組率高、特異性強(qiáng)、親和力好、抗體基因信息準(zhǔn)確等特點(diǎn)。

研究人員認(rèn)為，細(xì)胞內(nèi)PCR技術(shù)，是一種全新的擴(kuò)增抗體可變區(qū)基因方法，它在同一個(gè)載體上的輕鏈與重鏈的配對(duì)，不是人工隨機(jī)組合，而是在體內(nèi)的原始配對(duì)，從人免疫細(xì)胞中擴(kuò)增體內(nèi)親本配對(duì)的單鏈抗體可變區(qū)基因，克隆到噬菌體載體，同時(shí)利用完整細(xì)胞篩選特異性針對(duì)黑素細(xì)胞膜抗原的自身抗體，從而得到編碼疾病相關(guān)抗體基因的準(zhǔn)確信息。采用該技術(shù)能從分子水平上闡述自身抗體的產(chǎn)生機(jī)制、編碼基因規(guī)律及基因突變特點(diǎn)。