葉片離體培養(yǎng)有望實(shí)現(xiàn)藥用紫錐菊規(guī)?；嘀?/h1>

本報(bào)重慶訊 重慶郵電大學(xué)生物信息學(xué)院和重慶大學(xué)生物工程學(xué)院共同開展的重慶市科委自然科學(xué)基金項(xiàng)目“藥用紫錐菊(Echiancea purpurea)葉片離體培養(yǎng)技術(shù)”研究為實(shí)現(xiàn)藥用紫錐菊種苗工廠化快速繁殖提供了新途徑?？蒲腥藛T以藥用紫錐菊葉片為外植體，利用組織培養(yǎng)的方法誘導(dǎo)愈傷組織，成功地使其再分化形成完整植株。該研究建立的紫錐菊離體葉片的最佳培養(yǎng)條件可實(shí)現(xiàn)種苗快速生根，且生根率很高。此前利用藥用紫錐菊葉片進(jìn)行組培技術(shù)的研究尚未見報(bào)道。

紫錐菊為多年生草本植物，其含有羥基酰胺、多糖、倍半萜、多炔類、咖啡酸衍生物、黃酮等多種活性成分。藥理研究顯示，原產(chǎn)于美洲的藥用紫錐菊對(duì)免疫功能有促進(jìn)作用，可用于感染、感冒、關(guān)節(jié)炎、肺結(jié)核、氣管炎、扁桃體炎、濕疹等的治療。近年來，該植物受到國(guó)際上的普遍重視，成為國(guó)際市場(chǎng)需求量最大的植物藥之一。我國(guó)北京、沈陽(yáng)、山東等地近兩年從歐洲和美洲成功引種該植物。但是，由于傳統(tǒng)的種子育苗繁殖方法存在種子采集困難、發(fā)芽率低、需要低溫春化處理工藝等問題，生產(chǎn)有較大難度，難以實(shí)現(xiàn)規(guī)?；荒軡M足日益增長(zhǎng)的市場(chǎng)需求。因此，進(jìn)行藥用紫錐菊的組培快繁再生技術(shù)研究非常必要。

在研究中，科研人員在藥用紫錐菊的種苗上采取較嫩的葉片，對(duì)其進(jìn)行消毒處理后，將其接種到附加不同生長(zhǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)其生長(zhǎng)。研究中選用的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+吲哚-3-丁酸（0.5~3.0毫克/升）+萘乙酸（0.5~2.0毫克/升）+蔗糖（30克/升）+瓊脂（7克/升）。增殖培養(yǎng)基為MS+吲哚-3-丁酸(0.2毫克/升)+6-芐基腺嘌呤（0.3~0.9毫克/升）+赤霉素(0.1~0.7毫克/升)+蔗糖（30克/升）+瓊脂（7克/升）。生根培養(yǎng)基為1/2MS+吲哚-3-丁酸(0.5毫克/升)+萘乙酸(0.1毫克/升)+蔗糖（30克/升）+瓊脂（7克/升）。培養(yǎng)溫度（24±2）℃，光照強(qiáng)度2500勒克斯左右，光照時(shí)間12~14小時(shí)/天。

在接種8天后，葉片切口周圍出現(xiàn)膨大致密的翠綠色愈傷組織。兩周后，愈傷組織不斷增殖，逐漸形成圓形顆粒狀突起。3周后，圓形突起形成綠色不定芽，繼而伸長(zhǎng)形成小芽苗。平均每塊外植體可誘導(dǎo)5～11芽苗，且都在切塊的邊緣排列。培養(yǎng)25天后可形成具有肥綠葉片的小芽苗。

研究表明，不同激素濃度對(duì)植物愈傷組織的誘導(dǎo)分化和植株再生有重要影響。研究人員通過對(duì)培養(yǎng)基中施加不同濃度的萘乙酸和吲哚-3-丁酸檢驗(yàn)對(duì)葉片愈傷組織的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，藥用紫錐菊的葉片適宜在MS+吲哚-3-丁酸(2毫克/升)+萘乙酸(1毫克/升)+蔗糖(30克/升)+瓊脂(7克/升)培養(yǎng)基上分化成苗。

在增殖培養(yǎng)中，待芽伸長(zhǎng)并長(zhǎng)出綠色葉片時(shí)，科研人員將苗分割成單株，將其轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上。20～25天后，小芽基部膨大，或增殖形成具有3～4個(gè)小芽的叢生芽，芽苗可長(zhǎng)成3～5厘米的無根苗。一般30～35天繼代培養(yǎng)1次。在繼代培養(yǎng)中，需將大芽叢分割成小芽叢，剪去過長(zhǎng)的葉片，或?qū)⑵浣臃N在新的增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行擴(kuò)大繁殖，并適當(dāng)增強(qiáng)光照強(qiáng)度，使苗生長(zhǎng)健壯。不同的激素配比對(duì)叢生芽的出芽率有明顯的影響。要保持芽苗長(zhǎng)勢(shì)良好，且分化出芽時(shí)不長(zhǎng)愈傷組織，培養(yǎng)基應(yīng)為MS+6-芐基腺嘌呤(0.7毫克/升)+赤霉素(0.5毫克/升)+吲哚-3-丁酸(0.2毫克/升)+蔗糖(30克/升)+瓊脂(7克/升)。

據(jù)介紹，紫錐菊的試管苗生根較為容易，即將高3厘米以上的無根苗切下，將其轉(zhuǎn)到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)。12天時(shí)開始發(fā)根，25天后全部生根率達(dá)99％。根的數(shù)量為8～12條，最長(zhǎng)約3厘米，平均長(zhǎng)1.2厘米。激素對(duì)紫錐菊生根也有一定影響。當(dāng)培養(yǎng)基為1/2MS+萘乙酸（0.1毫克/升）+吲哚-3-丁酸（0.5毫克/升）+蔗糖(30克/升)+瓊脂(7克/升)時(shí)，生根效果好，根系較發(fā)達(dá)。培養(yǎng)4周后，根數(shù)達(dá)8~12條，根長(zhǎng)達(dá)3厘米左右。此時(shí)即可移栽。移栽前必須煉苗5~7天，即將苗取出，洗去附著在苗上的培養(yǎng)基，將其移栽到泥炭土及腐質(zhì)土混合的基質(zhì)中，并注意保溫、保濕。該方法的成活率可達(dá)90％。試管苗移栽3～4周后就可長(zhǎng)出新根、新葉。成活后，可按常規(guī)進(jìn)行栽培管理。

另外，研究人員還對(duì)葉片和葉柄不同部位的誘導(dǎo)分化和增殖能力進(jìn)行了對(duì)比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)葉片和葉柄越幼嫩，分化增殖能力越強(qiáng)；葉柄的分化主要出現(xiàn)在基部，數(shù)目較少，成苗速度快，芽苗健壯；葉片分化一般取中下部為宜，所誘導(dǎo)的不定芽數(shù)目多，成苗較慢，芽苗較弱。

（李標(biāo) 唐坤 王伯初）