牡丹皮中有效成分丹皮酚的毛細(xì)管電泳快速檢測新方法

牡丹皮(cortex m ou tan)是毛莨科植物牡丹(Paeonia suffruticosa Andr.)的干燥根皮,具有清熱涼血、活血化瘀等功效。丹皮酚(paeonol)為牡丹皮的重要有效成分之一(分子結(jié)構(gòu)見圖1),有抗菌消炎、降壓止血的作用,其含量測定對牡丹皮及其制劑的質(zhì)量控制和藥理研究具有重要的意義。藥典規(guī)定丹皮酚的測定方法為分光光度法,文獻(xiàn)報道較多的測定丹皮酚的其它方法有光譜法、化學(xué)發(fā)光法、高效液相色譜法和氣相色譜法等,后兩者儀器設(shè)備昂貴、試劑成本高、分析時間較長、所需樣品量較多。文獻(xiàn)采用毛細(xì)管電泳(CE)光學(xué)檢測的方法測定了丹皮酚,但分離需時較長,方法檢出限較高,分析速度和檢測靈敏度還有待提高。

在弱堿性條件下,丹皮酚易于離子化,本文首次采用毛細(xì)管電泳-高頻電導(dǎo)法成功分離檢測了丹皮酚,與文獻(xiàn)采用的CE光學(xué)方法相比,本方法簡便、快速、靈敏; 在優(yōu)化條件下,4min內(nèi)即可實現(xiàn)對丹皮酚的分析測定,檢出限為013μg/mL,檢測了牡丹皮中的丹皮酚含量,結(jié)果令人滿意。

實驗部分

儀器與試劑

高壓電源(自制),高頻電導(dǎo)檢測器(自制)。石英毛細(xì)管(150μm-i.d.),毛細(xì)管總長65.0cm,有效長度55.0cm,河北永年光導(dǎo)纖維廠生產(chǎn)。數(shù)據(jù)工作站,中山大學(xué)化學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院賴w

提供。信號采集使用臺灣EVOC出品的PCL-711B型A/D卡; 數(shù)據(jù)記錄與處理在普通P3微機(jī)上完成。

丹皮酚對照品(中國藥品生物制品檢定所); 三(羥甲基)氨基酸甲烷(Tris,GR香港分裝); 其余試劑均為國產(chǎn),AR; 所用水為二次去離子重蒸水。牡丹皮藥材購自廣州采芝林藥店(產(chǎn)地:四川)。

對照品溶液的制備和樣品的提取

稱取丹皮酚0.0150g,加背景電解質(zhì)溶液(3.0mmol/L 三乙胺-1.0mmol/L H3BO3-10%CH3OH)溶解并定容于10.0ml量瓶中,得質(zhì)量濃度為1.50mg/mL的對照品溶液。

將牡丹皮藥材粉碎,過(150±6.6)μm篩。稱取牡丹皮藥材粉末0.2000g,置于具塞錐形瓶中,加入上述背景電解質(zhì)溶液5.0ml,超聲提取30min,振搖后靜置,過濾。重復(fù)提取1次,合并兩次提取的濾液,定容于10.0ml容量瓶中,得待測樣品溶液。

實驗方法

毛細(xì)管柱在使用前,先用0.1mol/L NaOH、H2O、運行背景電解質(zhì)溶液分別洗30、15、15min。采用重力虹吸方式進(jìn)樣,位差25.0cm進(jìn)樣8.0s。分離電壓為2010kV。高頻電導(dǎo)檢測器的輸出信號經(jīng)數(shù)據(jù)工作站采集到微機(jī)中進(jìn)行實時數(shù)據(jù)處理、圖形顯示和數(shù)據(jù)文件存儲。實驗在恒溫(25℃)、恒濕(相對濕度60%)的條件下進(jìn)行。

結(jié)　論

弱堿性背景電解質(zhì)溶液有利于提取牡丹皮中的丹皮酚。在弱堿性的H3BO3-三乙胺背景電解質(zhì)體系中可實現(xiàn)牡丹皮中的丹皮酚的毛細(xì)管電泳分離和高頻電導(dǎo)檢測。本研究中所用的高頻電導(dǎo)檢測器,操作極為簡便,只需將毛細(xì)管穿過檢測器,檢測電極不與溶液接觸,不存在電極中毒的問題; 用毛細(xì)管電泳-高頻電導(dǎo)檢測法測定牡丹皮中的有效成分丹皮酚,樣品前處理簡單易行,方法簡便、快速、靈敏、可靠、廉價,結(jié)果滿意,是較好的檢測方法。作者:翟海云,徐健君,陳纘光,盧少蘭,蔡沛祥,莫金垣