靈芝多糖的提取

近年來，藥理學(xué)和免疫學(xué)的多方研究表明，靈芝多糖芝扶正固本最有效的成分之一，具有廣泛的藥理活性，排毒、抗放射，提高肝臟、骨髓合成dna、bna的能力，抗腫瘤增強(qiáng)機(jī)體免疫等效果。因此多糖的提取為廣大科研人員藥研制者所重視，他們不斷研究和探索靈芝多糖提取的方為弄清靈芝多糖的化學(xué)成分提供有力的理論依據(jù)，同時為許多疾病帶來福音。

一、靈芝茵絲體多糖的提取

(一)材料

1．菌種：湖南省食用菌研究所提供的韓國靈芝母種。

2．種子培養(yǎng)基：玉米粉2％ 大米粉2％

蔗糖2％ 磷酸二氫鉀o.1g

硫酸鎂0.05％

ph值自然

3．發(fā)酵培養(yǎng)基：麥麩浸出液10％ 葡萄糖2％

硫酸銨0.2％

磷酸二氫鉀0.2％ ph值自然

(二)方法

1．種子培養(yǎng)：

2．發(fā)酵培養(yǎng)生產(chǎn)菌絲體。

3．測定干、濕菌絲體。

將發(fā)酵液進(jìn)行離心，然后取其沉淀物，加人60％蔗糖，進(jìn)行高速(3000轉(zhuǎn)／分)密度梯度離心5分鐘，取上層菌絲體，洗凈蔗糖再壓干，即得濕菌體，然后再將濕菌體于高溫下烘干即為干菌體。分別稱取其重量。

4．多糖的提取。

(1)菌絲體預(yù)處理。取適量的靈芝濕菌體，用乙醇等有機(jī)溶劑進(jìn)行處理，以除去濕菌體中的脂類物質(zhì)，同時使糖苷酶失去活性，防止多糖的降解。

(2)用熱水提取多糖。取上面經(jīng)預(yù)處理的靈芝濕菌體，放人1：20的熱水(95℃)中浸提，一次3小時，連續(xù)浸提3次，合并3次的水浸提液減壓、濃縮至一定體積，再用3倍體積的95％乙醇混合，靜置10－12小時，再離心，最后加入75％的乙醇反復(fù)洗滌，以沉淀多糖。此沉淀物為粗多糖，其中混雜有蛋白質(zhì)、色素、低聚糖等小分子雜質(zhì)，一般要經(jīng)過純化。

(3)多糖的純化，去蛋白質(zhì)和deae纖維素柱層析。去蛋白質(zhì)一般采用sevag法：加入0.2倍多糖溶液體積的氯仿和0.04倍體積的正丁醇混合振蕩半小時進(jìn)行分離，直至氯仿與水的界面無沉淀為止，且要重復(fù)處理2-3次才能有效除去多糖中的蛋白質(zhì)。多糖純化一般采用硼酸型deae纖維素柱層析法：取脫蛋白后的多糖，分別以0.025mol／l、0.1mol/l的硼砂，0.1mol/l的氫氧化鈉溶液進(jìn)行洗脫，然后用0.2％恿銅硫酸液比色測定吸收度，收集有多糖的洗脫液，再濃縮脫鹽即得所需的多糖。

(4)多糖純度的鑒定。

可用電泳法進(jìn)行鑒定，如果存在單一帶，說明為純多糖。

5．多糖與多糖中蛋白質(zhì)含量的測定：

取一定量菌絲體粗多糖，加水煮沸溶解，用sevag方法脫去蛋白考馬斯亮蘭法測其粗多糖中蛋白質(zhì)和多糖的含量。測得菌絲體中粗多糖含17.01％、多糖含5.43％、蛋白質(zhì)含量2.16％。

二、靈芝子實(shí)體多糖的提取

(一)材料

1．菌種：韓國靈芝栽培種。

2．子實(shí)體栽培生產(chǎn)料：木屑78％，米糠20％，蔗糖1％，

石膏1％，ph值自然。

(二)方法

1．子實(shí)體栽培。

2．靈芝子實(shí)體預(yù)處理。

3．子實(shí)體多糖的提取。

取適量的靈芝子實(shí)體，搗碎成粉末，用80目篩過篩，然后用熱水提取法進(jìn)行提取。具體操作同菌絲體多糖的提取。提取出的粗多糖含有色素、蛋白質(zhì)等小分子雜質(zhì)，也須除去。

4．去除蛋白質(zhì)和色素。

子實(shí)體粗多糖去除蛋白質(zhì)也采用se陰法。去除色素，尚未發(fā)現(xiàn)很理想的方法。一般用乙醇進(jìn)行反復(fù)沖洗，但效果不很理想。

5．多糖純度的鑒定。

同菌絲體多糖純度的鑒定。

6．子實(shí)體粗多糖、多糖及蛋白質(zhì)含量的測定。

具體方法同菌絲體多糖及蛋白質(zhì)含量的測定。測得子實(shí)體中粗多糖7.5％、多糖1.5％，蛋白質(zhì)0.6％，其含量均低于菌絲體中的含量?？梢娋z體階段就形成了靈芝多糖的有效成分，為靈芝液體深層發(fā)酵生產(chǎn)菌絲體提供了科學(xué)依據(jù)。