《生物化學(xué)與分子生物學(xué)》 (一)P/0值測(cè)定

P/0值指在氧化磷酸化過程中消耗一克原子氧所消耗的無機(jī)磷的克原子數(shù)，或者說消耗一克原子氧所生成的ATP的克分子數(shù)。P/0值實(shí)質(zhì)上指的是呼吸過程中磷酸化的效率。

測(cè)定P/0值的方法通常是在一密閉的容器中加入氧化的底物、ADP、Pi、氧飽和的緩沖液，再加入線粒體制劑時(shí)就會(huì)有氧化磷酸化進(jìn)行。反應(yīng)終了時(shí)測(cè)定O2消耗量(可用氧電極法)和Pi消耗量(或ATP生成量)就可以計(jì)算出P/0值了。在反應(yīng)系統(tǒng)中加入不同的底物，可測(cè)得各自的P/0值，結(jié)合我們所了解的呼吸鏈的傳遞順序，就可以分析出大致的偶聯(lián)部位了。

表6-3　離體線粒體的P/0比值

底物呼吸的組成P/0比值生成ATP數(shù)（1）β-羥丁酸NAD+→FMN→CoQ→Cyt→O22.4-2.83（2）琥珀酸FAN→CoQ→Cyt→O21.72（3）抗壞血酸Cyt→Cytaa3→O20.881（4）細(xì)胞色素cCytaa3→O20.61-0.681

從上表可以看出P/0值為小數(shù)，由于線粒體的偶聯(lián)作用在離體條件下不能完全發(fā)揮，故可認(rèn)為實(shí)際的ATP生成數(shù)是他們所接近的正整數(shù)值。

比較表中的(1)和(2)，呼吸鏈傳遞的差異是在CoQ之間，兩者ATP的生成數(shù)相差1，所以這個(gè)ATP的生成部位一定在NAD→CoQ之間。

比較表中(2)和(3)，呼吸鏈傳遞的差異是在Cyt c之間，兩者ATP的生成數(shù)相差1，所以這個(gè)ATP的生成部位在CoQ→Cyt c之間。

比較表中(3)和(4)，生成的ATP數(shù)均為1，呼吸鏈傳遞的區(qū)別是在Cyt c→Cyt aa3，故Cytc→ aa3不存在偶聯(lián)部位，而在Cyt aa3→O2之間存在著一個(gè)偶聯(lián)部位。