《免疫學(xué)和免疫學(xué)檢驗(yàn)》 三、免疫球蛋白的分類鑒定

疑為丙種球蛋白病的患者，經(jīng)血清蛋白區(qū)帶電泳和免疫球蛋白測定，已基本證實(shí)是否有免疫球蛋白的異常增高和其含量的多少，但是增高的M蛋白究竟是哪一類免疫球蛋白，仍需進(jìn)一步分類鑒定，常應(yīng)用各種類型的特異性抗血清，做不同形式的電泳或免疫擴(kuò)散。

（一）免疫電泳

免疫電泳是將區(qū)帶電泳和免疫擴(kuò)散結(jié)合起來的一種免疫學(xué)分析法。血清標(biāo)本先經(jīng)區(qū)帶電泳將各種蛋白成分分離開，繼而用各種特異性抗血清進(jìn)行免疫擴(kuò)散，根據(jù)M蛋白在免疫電泳中所形成的特殊沉淀弧，觀察其電泳遷移位置與抗原特異性，可將M蛋白的免疫球蛋白類型和其輕鏈型加以鑒定。一般多用抗IgG、IgM、IgA、κ和λ輕鏈等5種抗血清進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，用抗正常人血清作為對照。M蛋白與相應(yīng)抗體發(fā)生反應(yīng)所出現(xiàn)的沉淀弧較為特殊，較普通沉淀弧寬，凸出呈弓形，不難辨認(rèn)。如有下列情況，可作出判斷或提示。

1．如果待測血清標(biāo)本與某型免疫球蛋白重鏈及輕鏈抗血清產(chǎn)生相同遷移度的特殊沉淀弧，提示存在單克隆丙種球蛋白（M蛋白），此現(xiàn)象多見于IgG、IgA或IgM型多發(fā)性骨髓瘤或原發(fā)性巨蛋白血癥等（圖26-2）。

圖26-2 IgAλ型骨髓瘤的免疫電泳圖譜

孔中為血清標(biāo)本，槽中為抗血清，箭頭所指為骨髓瘤蛋白

a：抗正常人血清；b：抗IgG血清；c：抗IgA血清；

d：抗IgM血清；e：抗κ血清；f：抗λ血清

2．在同一抗輕鏈血清的反應(yīng)中，同時(shí)出現(xiàn)二條毗鄰的特殊沉淀?。▓D26-3），則可能是除M蛋白以外還存在游離輕鏈，偶爾也可見兩種M蛋白，此時(shí)應(yīng)進(jìn)一步測定尿中的本周蛋白。

3．患者血清中僅與其中一種抗輕鏈抗血清產(chǎn)生一種特殊的沉淀弧，而其他5種抗重鏈抗血清均不產(chǎn)生此種特殊的沉淀弧，這種情況可能是①伴有腎功能不全的輕鏈病，游離輕鏈較少從尿中排出而滯留于血液中；②存在輕鏈的四分子多聚體，分子量大（90kD），不易從尿中排出，而留存于血液中；③尚未發(fā)現(xiàn)的新重鏈的免疫球蛋白。

圖26-3I gGκ型骨髓瘤伴κ型本周蛋白尿的免疫電泳圖譜

上孔為尿液，下孔中為血清標(biāo)本，槽中為抗血清，箭頭所指為骨髓瘤蛋白b：

抗IgG血清；c：抗IgA血清；d：抗IgM血清；e：抗κ血清；f：抗λ血清

圖26-4 IgG重鏈病的免疫電泳圖譜

上孔中為尿液，下孔中為血清，槽中為抗血清，

箭頭所指為骨髓瘤蛋白a：抗正常人血清；b：抗IgG血清；c：抗

IgA血清；d：抗IgM血清；e：抗κ血清；f：抗λ血清

4．若患者血清只與IgG、IgA或IgM中的一種抗重鏈血清產(chǎn)生一特殊沉淀弧，但在兩型抗輕鏈血清中無相應(yīng)位置的沉淀弧出現(xiàn)，血清標(biāo)本經(jīng)2-巰基乙醇還原處理后，仍無改變，提示可能是重鏈?。▓D26-4），需進(jìn)一步測定其分子量。

5．非分泌型丙種球蛋白病血清中某一類型的免疫球蛋白含量一般不會(huì)太高，沉淀弧帶偏近抗體槽，以致影響分析。必要時(shí)需對血清標(biāo)本進(jìn)行不同稀釋后再作試驗(yàn)，以資比較。有時(shí)某些M蛋白（如IgA或IgM）的四級結(jié)構(gòu)會(huì)阻礙輕鏈抗原決定簇與其相應(yīng)抗血清結(jié)合，因而誤診為重鏈病。這時(shí)需在血清標(biāo)本中加入2-巰基乙醇（10μl/ml血清）作還原處理后再作試驗(yàn)，才能獲得正確結(jié)果。作游離輕鏈分析時(shí)，由于輕鏈分子量小，擴(kuò)散很快，要每隔10min觀察一次結(jié)果，并注意標(biāo)本濃度不宜過高，否則難以獲得滿意結(jié)果。

如果免疫電泳仍不能完全進(jìn)行M蛋白的分類鑒定，可應(yīng)用免疫選擇電泳與免疫固定電泳作為補(bǔ)充，以便進(jìn)一步鑒定。

（二）免疫選擇電泳

將含抗κ或λ血清的瓊脂制成薄層瓊脂板，打孔后加入待測血清或其他標(biāo)本進(jìn)行火箭電泳，與標(biāo)本相應(yīng)的免疫球蛋白形成火箭樣沉淀峰。然后于孔的兩側(cè)各挖一槽，加入某型免疫球蛋白的抗血清或另一型輕鏈抗血清，溫育擴(kuò)散后，按沉淀弧形成的情況，進(jìn)行分析鑒定。圖26-5為α重鏈病和IgA骨髓瘤的結(jié)果。

圖26-5 免疫選擇電泳圖譜示例孔中為血清標(biāo)本，槽中為抗IgA重鏈抗血清KL表示瓊脂中含抗κ及抗λ抗血清

A：正常人；B：α重鏈?。籆：IgA骨髓瘤

圖26-6 免疫固定電泳圖譜示例（IgA-λ型M蛋白）

κ、λ、G、A、M分別代表覆蓋含抗κ，抗λ，抗IgG，

抗IgA和抗IgM的抗血清；箭頭所指為加樣處

（三）免疫固定電泳

該方法類似免疫電泳，將待測血清或其他標(biāo)本在瓊脂平板上作區(qū)帶電泳，分離后于其上覆蓋含抗κ或λ輕鏈或各類重鏈的抗血清濾紙，當(dāng)抗體與某區(qū)帶中的單克隆免疫球蛋白結(jié)合后，便形成復(fù)合物而沉淀下來，再通過漂洗與染色，呈現(xiàn)濃而狹窄的著色區(qū)帶，即可判斷單克隆丙種球蛋白的輕鏈和重鏈型別（圖26-6）。