《免疫學(xué)和免疫學(xué)檢驗(yàn)》 二、溶血反應(yīng)測(cè)定補(bǔ)體法

（一）CH50試驗(yàn)原理

補(bǔ)體最主要的活性是溶細(xì)胞作用，這種活性很容易通過(guò)溶血反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)。在一個(gè)適當(dāng)?shù)?、穩(wěn)定的反應(yīng)系統(tǒng)中，溶血反應(yīng)對(duì)補(bǔ)體的劑量依賴呈一個(gè)特殊的S形曲線（圖14-1）。

圖14-1溶血程度與補(bǔ)體含量的關(guān)系

從圖14-1可以看出，在輕微溶血和接近完全溶血時(shí)，補(bǔ)體量的變化不能使溶血程度有顯著改變，速溶血對(duì)補(bǔ)體量的變化不敏感。但在半溶血（50％溶血）上下時(shí)曲線最陡，即使補(bǔ)體含量?jī)H有較小變動(dòng)時(shí)，溶血程度也會(huì)發(fā)生較大的改變，也就是說(shuō)對(duì)補(bǔ)體量的變化非常敏感。故采用50％溶血作為終點(diǎn)指標(biāo)要比100％溶血敏感得多，這一方法稱為補(bǔ)體50％溶血（complementhemolysis50％），簡(jiǎn)稱為CH50。

（二）CH50試驗(yàn)方法

取新鮮血清標(biāo)本進(jìn)行試驗(yàn)。按表14-3的要求在各管中加入試劑和反應(yīng)物，一起放37℃水浴箱中溫育30min。

做CH50試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)同時(shí)配制50％溶血的標(biāo)準(zhǔn)管。取2％SRBC懸液0.5ml，加2.0蒸餾水，使SRBC全部溶解；再加入2.0ml1.8％NaC1溶液校正為等滲溶液；最后加入2％SRBC懸液0.5ml，即成為50％溶血狀態(tài)；混勻后取該懸液2.5ml，隨試管一起進(jìn)行溫育，便是50％溶血標(biāo)準(zhǔn)管。

表14-3總補(bǔ)體溶血活性測(cè)定

試管號(hào)碼1:20稀釋血清（ml）巴比妥緩沖液（ml）2U溶血素（ml）2％羊紅細(xì)胞（ml）10.101.400.50.520.151.350.50.530.201.300.50.540.251.250.50.550.301.200.50.560.351.150.50.570.401.100.50.580.451.050.50.590.501.000.50.5100.001.500.50.5

溫育后將所有試管2500r/min離心5min，通過(guò)觀察比較，選擇溶血程度與標(biāo)準(zhǔn)管相近的兩管在分光光度計(jì)上分別讀取吸光度，以最接近標(biāo)準(zhǔn)管的那一管定為最高有效反應(yīng)管，取其稀釋倍數(shù)代入下列公式，求得CH50的測(cè)定值（單位U）。

每毫升血清總補(bǔ)體活性（單位）＝×稀釋倍數(shù)

用CH50法測(cè)定總補(bǔ)體溶血活性時(shí)，所測(cè)得的值與反應(yīng)體積成反比例關(guān)系，上例采用的液體總量為2.5ml，測(cè)得的總補(bǔ)體活性的參考范圍為50～100U/ml。

（三）臨床意義

CH50法主要檢測(cè)的是補(bǔ)體經(jīng)典途徑的溶血活性，所反映的主要是補(bǔ)體9種成分的綜合水平。如果測(cè)定值過(guò)低或者完全無(wú)活性，首先考慮補(bǔ)體缺陷，可分別檢測(cè)C4、C2、C3和C5等成分的血清含量；嚴(yán)重肝病時(shí)血漿蛋白合成能力受損，營(yíng)養(yǎng)不良時(shí)蛋白合成原料不足，這些也都可以不同程度地引起血清補(bǔ)體水平下降。

在患系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和強(qiáng)直性脊柱炎等自身免疫病時(shí)，血清補(bǔ)體水平隨病情發(fā)生變化。疾病活動(dòng)期補(bǔ)體活化過(guò)度，血清補(bǔ)體水平下降；病情穩(wěn)定后補(bǔ)體水平又反應(yīng)性增高。另外，補(bǔ)體各成分在不同的自身免疫病時(shí)可有特征性的表現(xiàn)（詳見(jiàn)第二十五章），因此補(bǔ)體檢測(cè)?？勺鳛樽陨砻庖卟≡\斷或是否有疾病活動(dòng)的參考指標(biāo)。

細(xì)菌感染、特別是革蘭陰性細(xì)菌感染時(shí)，常因補(bǔ)體旁路途徑的活化過(guò)度引起血清補(bǔ)體水平降低。心肌梗塞、甲狀腺炎、大葉性肺炎、糖尿病、妊娠等情況下血清補(bǔ)體水平常升高。