各省、自治區(qū)、直轄市衛(wèi)生廳局、中醫(yī)藥管理局,新疆生產(chǎn)建設兵團衛(wèi)生局：
全國中醫(yī)藥特色社區(qū)衛(wèi)生服務示范區(qū)創(chuàng)建活動自2003年開展以來，各地積極開展社區(qū)中醫(yī)藥服務工作，取得了明顯的成效，積累了許多有益的經(jīng)驗。為指導各級衛(wèi)生、中醫(yī)藥行政管理部門、社區(qū)衛(wèi)生服務機構(gòu)進一步深入開展社區(qū)中醫(yī)藥服務工作，我局對各示范區(qū)社區(qū)中醫(yī)藥服務工作規(guī)律性經(jīng)驗和規(guī)范性做法進行提煉、整理，起草制定了《社區(qū)中醫(yī)藥服務工作指南（試行）》?，F(xiàn)印發(fā)給你們，請結(jié)合各自實際情況，在工作中參考使用。在試行過程中有何意見和建議，請及時反饋國家中醫(yī)藥管理局醫(yī)政司。
聯(lián) 系 人：嚴華國 吳 迪
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二○○九年八月五日
從這個權(quán)威性的方法分類來看，前面所提到的二類測酶活性濃度方法都應歸納為動態(tài)法。目前廣為流行的“動態(tài)法”命名顯然是不確切的或者是不合適的。應該更多采用IFCC文件中建議的“連續(xù)監(jiān)測法”命名。
從酶反應曲線來比較此二類方法。圖17-7是一個典型酶反應過程。
圖17-7 酶促反應中基質(zhì)[S]、產(chǎn)物[P]
和反應速率V在不同時間變化的模式圖
在酶作用下，底物[S]濃度不斷下降，隨之有相應產(chǎn)物[P]產(chǎn)生。不少酶在反應一開始的階段，由于各種因素影響，反應速度較慢，稱為延滯期，隨后在過量濃度的底物存在條件下，酶反應以恒定的速度進行，不受底物濃度變化的影響，這段反應稱為線性反應期或零級反應期。隨時間延長，反應速度除與酶量有關(guān)，還與底物濃度有關(guān)。即v＝k(a－x)，式中a為原來底物濃度，x為消耗的底物濃度，如反應物濃度項上指數(shù)為1，稱為一級反應，假如反應速率受二種或二種以上物質(zhì)濃度的影響，則各個反應物濃度項上指數(shù)總和作為反應級數(shù)，可以分別為一級、二級或多級反應，總的將這段反應時期稱為非線性反應期。
很明顯如測反應速度的目的是為了從此推算出酶含量的多少，則只有測線性反應期的反應速度才能作到此點。在延滯期、非線性期測的結(jié)果不準確，一般是偏低的。
取樣法由于方法學上的限制，一般只測二管：一為沒發(fā)生酶反應的對照管，另一管測酶作用一段時間后反應物的變化，實際上測得是平均速度，而且二管間隔時間都較長，在半小時左右，圖17-8中t，t分別代表不同時間二管反應物的量，雖然從t到t反應物變化量是相同的。但實際反應過程是多種多樣的。
只有當反應如曲線A時，用“固定時間法”才能測出真實的酶活性，實際工作中是很少見的，圖中曲線B代表了最常見的反應情況，在一個很短的線性反應期后在大部分測定期間內(nèi)主要為非線性反應期。曲線C說明在測定期間包括了延滯期，曲線D則不僅包括了延滯期，還包括非線性期，在這些反應中如用固定時間法來測定，結(jié)果是不夠準確的，一般是偏低的，而且酶濃度愈高，偏離程度愈大。
假如從上節(jié)敘述中得出一個重要結(jié)論：即在設計和選擇測定酶活性濃度方法時必須是在“最適條件”下測定最大反應速度。那么從這段敘述中可得出一個對上述結(jié)論一個很重要的補充，即所測的最大反應速度還應該是初速度即V。
理論上的V在實際工作中是不存在的，必須讓酶和底物作用一段時間，消耗掉一定量的底物，才能測出反應速度，一般說，如消耗底物在5％內(nèi)所測到的反應速度都可認為是初速度，如底物濃度很高時，底物消耗在20％以內(nèi)的反應往往還在線性反應期。
連續(xù)監(jiān)測法能滿足上述重要要求。由于不需停止酶反應。很容易得到整個酶反應曲線，然后根據(jù)反應曲線情況，避開延滯期和非線性反應期，只在線性反應期測定最大反應初速度。同時由于分光光度法的高靈敏度，自動生化分析儀的高精密度，連續(xù)監(jiān)測法能在很短時間，甚至在1分鐘反應時間，準確測定反應速度，從而求出準確的酶活性濃度?！肮潭〞r間法”測定時間長達30分鐘，很難滿足上述方法學上測定初速度V的要求。
圖17-8 二點測定法中可能引起的誤差
從理論上說，只有當測定的是初速度，米氏方程式才能成立，并可能測出真正的Km。用“固定時間法”測出的速度受到逆反應速度的影響。可以下式表示有逆向反應存在時的酶反應過程。
k1 k2k3
E＋S→ES→EP→E＋P
← ← ←
K－1k－2k－3
存在著EP和P時，就會出現(xiàn)逆反應，此時所測的為一表觀速度（Va）或反應的凈速度。
Va＝k2[ES]－k－2[EP]
[E]t代表酶總量，在反應過程中包含了游離酶[E]、酶底物復合物[ES]和酶產(chǎn)物復合物[]EP]。
Ks為[ES]的解離常數(shù)，Kp為[EP]的解離常數(shù)，故：
代入上式得：
根據(jù)Maldanc公式Keq＝VfKp/VrKs得：
在反應特定時間，產(chǎn)物[P]為一定值，上式得：
此公式從理論上說明，如所測反應有逆反應存在時，不存在原來的米-門方程式。用各種作圖法很難求出準確的米氏常數(shù)。如果說所測酶反應不僅存在著逆反應，產(chǎn)物還抑制了酶反應，則動力學公式將更為復雜。這就是為什么不僅在建立方法時，就是在研究酶的動力學時，也總是希望所測量的都是酶反應的初速度。
以上這二類方法并不是概括了所有測酶活性濃度的方法，也并不排除在非線性反應期測酶活性濃度的可能性。如固定底物變化量，則不同標本達到此變化終點的時間，與酶量成反比例，Somogyi曾提出一種測淀粉酶的方法，酶與底物混合后。每隔半分鐘取一滴出來加入碘液呈色，觀察顏色由紫色變?yōu)榧t色時間，也就是淀粉酶全部水介變?yōu)楹臅r間，并由此時間的長短計算出酶含量高低，這類方法不需使用很高濃度的底物，有其獨特之外，在自動生化分析儀中也曾使用類似的方法，值得人們重視。