《中國(guó)生物制品規(guī)程》 人白蛋白（或丙種球蛋白）純度測(cè)定

（醋酸纖維素薄膜電泳法）

1試劑

1.1　巴比妥緩沖液（Ph8.6）

取巴比妥2.76g，巴比妥鈉15.45g，加蒸餾水溶解成1000ml。

1.20.5%氨基黑染色液

取氨基黑10B0.5g，溶于甲醇50ml、冰醋酸10ml及蒸餾水40ml的混合液中。

1.3漂洗液

取乙醇45ml，冰醋酸5ml及蒸餾水50ml，混勻。

1.40.2mol　/L氫氧化鈉

取8g氫氧化鈉，加蒸餾水溶解成1000ml。

1.5透明液

取冰醋酸25ml，加無水乙醇75ml，混勻。

2　操作

2.1電泳

將膜條（2×8cm）粗糙面向下，浸入巴比妥緩沖液中，待完全浸透，取出用濾紙吸去多余的緩沖液，將膜條粗糙面向上，加于電泳支架上的濾紙橋上（或橋下），于膜上距負(fù)極端2cm處，直線狀滴加蛋白質(zhì)含量約5%的樣品2～3μl，通電，電流控制在0.4~0.6mA/cm[總電流量=生產(chǎn)要膜的寬度（cm）×膜條數(shù)]，同時(shí)取新鮮人血清作對(duì)照，電泳時(shí)間以白蛋白與丙種球蛋白之間的電泳展開距離達(dá)3～4cm為宜。

2.2　染色

電泳完畢，將膜條取下浸于染色液中，2～3分鐘后，用漂洗液反復(fù)漂洗至底色完全脫凈。

2.3　透明

將漂凈并完全干后的膜條浸于透明液至全部浸透為止，取出平鋪于潔凈的玻璃板上，干后即成透明薄膜，可供掃描法測(cè)定樣品純度和作為標(biāo)本長(zhǎng)期保存用。

2.4　純度測(cè)定

2.4.1　洗脫法：將漂洗凈的膜條用濾紙吸干，與正常人血清的電泳圖譜作對(duì)照，剪下白（或丙種球蛋白）帶A及其他雜蛋白質(zhì)區(qū)帶B，分別浸于5ml0.2mol/L氫氧化鈉溶液中，振搖數(shù)次，至色澤完全浸出后，于620nm波長(zhǎng)下測(cè)其OD值，以相同條件下，無蛋白質(zhì)部分的膜條（其長(zhǎng)度分別同A及B）作空白對(duì)照。

樣品中白蛋白（或丙種球蛋白）含量%=A的OD值－A空白的OD值/（A的OD值－A空白的OD值）+（B的OD值－B空白的OD值）×100%

2.4.2　掃描法：將干燥的樣品醋酸纖維素薄膜電泳圖譜放入自動(dòng)光密度掃描儀，通過反射（未透明薄膜）或透射（已透明薄膜）方式測(cè)定各蛋白質(zhì)電泳區(qū)帶的OD值，根據(jù)儀器性能，可自動(dòng)或手工方法計(jì)算出樣品白蛋白（或丙種球蛋白）的百分含量。

附注

用掃描法測(cè)定白蛋白（或丙種球蛋白）純度時(shí)，可采用麗春紅染色法，其染色液及漂洗液配方如下：

0.2%紅染色液：

取麗春紅0.2g，磺基水楊酸3g及三氯醋酸3g，用蒸餾水溶解并稀釋至100ml。

漂洗液：

取冰醋酸3ml，用蒸餾水稀釋至100ml。