《中國生物制品規(guī)程》 生物制品熱原質(zhì)試驗規(guī)程

本試驗系將一定劑量的供試品靜脈注入家兔，在規(guī)定期間內(nèi)觀察家兔體溫升高情況，以判定供試品中所含熱原質(zhì)的限度是否符合規(guī)定的一種方法。

1　供試驗用家兔

1.1　應健康無傷，雌者無孕體重，1.7～2.5kg。

1.2　測溫前至少3日應用同一飼料喂養(yǎng)。在此期間內(nèi)，體重應不減輕，精神、食欲、排泄等不得有異常。

1.3　未曾用于熱原質(zhì)試驗的家兔，應在試驗前1～3日內(nèi)預檢體溫挑選一次，挑選條件與檢查供試品時相同，但不注射藥液。測溫探頭插入肛內(nèi)深度約6cm，保留2分鐘或更長時間，間隔1小時測溫1次，連測4小時。4小時內(nèi)各兔體溫均在38.0～39.8℃，且最高最低溫差不超過0.5℃者，方可供試驗用。

1.4　凡熱原質(zhì)試驗用過的家兔，若供試品判為符合規(guī)定，家兔休息48小時后可重復使用。對血液制品、抗毒素和其他同一過敏原的供試品在5天內(nèi)可重復使用。

2　試驗前準備

2.1　試驗用的注射器、針頭及一切與供試液接觸的器皿，洗凈后應經(jīng)250℃至少30分鐘或180℃至少2小時干烤滅熱原質(zhì)。

2.2　測溫探頭的精確度應為±0.1℃。每只家兔注射前、后應使用同一支測溫探頭。

2.3　熱原質(zhì)檢查前1～2日，供試驗用家兔盡可能處于同一溫度環(huán)境中。實驗室溫度保持在15～25℃。試驗的全過程中室溫變化不得大于3℃，并應保持安靜，避免強光照射和噪音干擾?？諝庵邪焙繎陀?0ppm。

3　試驗

3.1　每批供試品初試用3只，復試用5只家兔。

3.2　試驗前家兔應禁食2小時以上再開始測量正常體溫，共測兩次，間隔30～60分鐘，兩次溫差大得大于0.2℃，以此兩次體溫的平均值為該兔的正常體溫，同組兔間正常體溫之差不得大于1.0℃。用測溫探頭測量時，家兔固定30～60分鐘后開始檢溫。

3.3　測家兔正常體溫后15分鐘內(nèi)，按規(guī)定劑量自耳邊靜脈緩緩注入預熱至38℃的供試品，每隔30分鐘測量體溫1次，連測6次。

3.4　若第6次較第5次升溫超過0.2℃并超過正常體溫時，應連續(xù)測量，直至與前一次相比升溫不超過0.2℃。若降溫>0.4℃，并低于正常體溫時，應繼續(xù)測量至降溫≥0.6℃為止。

4　結果判斷

每只兔的正常體溫與注射供試品后最高升溫之差，為該兔的應答。出現(xiàn)負值的規(guī)定如下：降溫值≤0.4℃為兔溫正常波動范圍，以“0”計。降溫值≥0.60℃需重試。降溫值＞0.40至＜0.60℃時，若供試組家兔中僅一只降溫在此范圍內(nèi)，以“0”計，若供試組家兔中有2只或2只以上降溫在此范圍內(nèi)，應重試。

4.1　肌內(nèi)注射制品判定標準

4.1.1　初試結果判定

4.1.1.1　符合下列情況之一者，判為合格：

3兔升溫均低于0.80℃，并且3兔升溫總和不超過1.80℃；3兔中1只升溫達0.80℃，其他升溫均低于0.80℃，并且3兔升溫總和不超過1.80℃。

4.1.1.2　有下列情況之一者，復試一次：

3兔中1只升溫超過0.80℃；3兔升溫總和超過1.80℃。

4.1.1.3　有下列情況之一者，判為不合格：

3兔中有2只升溫0.80℃或0.8℃以上；3兔升溫總和超過2.40℃。

4.1.2　復試結果判定

4.1.2.1　符合下列情況者，判為合格：

初、復試8兔中，有2只或2只以下升溫0.80℃或0.80℃以上，并且升溫總和不超過4.00℃。

4.1.2.2　有下列情況之一者，判為不合格：

初、復試8兔中，有2只以上升溫0.80℃或0.80℃以上，并且升溫總和超過4.00℃。

4.2　靜脈注射制品判定標準

4.2.1　初試結果判定

4.2.1.1　符合下列情況者，判為合格：

3兔升溫均低于0.60℃，并且3兔升溫總和不超過1.40℃。

4.2.1.2　有下列情況之一者，復試一次：

3兔中1只體溫升高0.60℃或0.60℃以上；3兔升溫總和超過1.40℃。

4.2.1.3　有下列情況之一者，判為不合格：

3兔中2只體溫升高0.60℃或0.60℃以上；3兔升溫總和為1.80℃或超過1.80℃。

4.2.2　復試結果判定

4.2.2.1　符合下列情況者，判為合格：

初、復試8兔中，2只或2只以下升溫0.60℃或0.60℃以上，并且升溫總和不超過3.50℃。

4.2.2.2　有下列情況之一者，判為不合格：

初、復試8兔中，2只以上升溫0.60℃或0.60℃以上；初、復試8兔升溫總和超過3.50℃