《中國生物制品規(guī)程》 附錄1　人凝血因子Ⅷ效價(jià)測定（一步法）

1　試劑

1.1樣品稀釋液：取1容積的3.8%枸櫞酸鈉液加入5容積咪唑緩沖液。

1.1.1　咪唑緩沖液

稱0.68g咪唑和1.17g氯化鈉溶于100ml蒸餾水中，加入42.2ml　0.1mol/L鹽酸，然后被　加入蒸餾水至200ml,pH為7.3。

1.1.23.8%枸櫞酸鈉溶液

稱9.5g枸櫞酸鈉溶解于250ml蒸餾水中。

1.2　血小板代用品“兔（人）腦組織的氯仿抽提液”。用前用生理鹽水稀釋至適當(dāng)倍數(shù)。

1.3白陶土生理鹽水混懸液

稱0.5g白陶土加生理鹽水至100ml即可使用。

1.4　基質(zhì)血漿

取人凝血因子Ⅷ含量低于2%的血友病病人血漿或人工基質(zhì)血漿，然后分裝于5ml安瓿，凍干或-30℃保存。

1.50.05mol/L氯化鈣溶液

稱111g氯化鈣溶于1000ml蒸餾水中，配制成1mol/L氯化鈣貯存液，用前進(jìn)行20倍稀釋，配成0.05mol/L氯化鈣溶液。

1.6　人凝血因子Ⅷ標(biāo)準(zhǔn)品及標(biāo)準(zhǔn)血漿

人凝血因子Ⅷ國家標(biāo)準(zhǔn)品或經(jīng)國家標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)化的工作標(biāo)準(zhǔn)（定量分裝凍干，置-30℃保存，一般2IU/ml左右），用前取樣品稀釋液溶解成1IU/ml。

標(biāo)準(zhǔn)血漿系取30份新鮮正常人血漿等量混合后，分裝于小瓶內(nèi)，置-30℃保存。自采血后至分漿凍結(jié)整個過程不得超過4小時。

1.7待測樣品

按標(biāo)示量加入注射用水溶解，測定時稀釋成1IU/ml。

2　測定

2.1取2支試管，每管加入0.1ml基質(zhì)血漿和0.1ml樣品稀釋液，混勻，再加0.1ml血小板代用品和0.1ml白陶土懸液，混勻，將試管置37℃水浴保溫一定時間（一般2～6分鐘），然后加入0.1ml0.05mol/L氯化鈣溶液，記錄凝固時間，2管平均值為基質(zhì)血漿的“空白”值（一般應(yīng)大于3分鐘）。

2.2　標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)準(zhǔn)血漿

用樣品稀釋液分別進(jìn)行10倍、20倍、40倍、100倍和200倍稀釋，用不同稀釋濃度標(biāo)準(zhǔn)品代替2.1項(xiàng)試驗(yàn)中樣品稀釋液，按上述方法分別測定凝固時間。

2.3　待測樣品稀釋成約0.02～0.04IU/ml，代替2.1項(xiàng)試驗(yàn)中樣品稀釋液，同時分別測定凝固時間。

2.4測定時要求每個稀釋度平行測定2管，兩管之差不得超過均值10%，否則重測。

3　計(jì)算

將標(biāo)準(zhǔn)品5個不同稀釋度所含人凝血因子Ⅷ單位（IU/ml），分別取其對數(shù)值，再將其各相應(yīng)濃度所測得凝固時間（秒），也分別取對數(shù)值，然后按照統(tǒng)計(jì)學(xué)方法作直線回歸方程。

方程式：log　y=b　olg　x+a

其中x代表人凝血固子Ⅷ單位數(shù)，y代表測得相應(yīng)凝固時間（秒）。

將測試樣品所得到凝固時間（秒）代入方程式計(jì)算x值。然后將所得x值乘以樣品稀釋的倍數(shù)，即為每ml中人凝血因子Ⅷ含量。