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可溶性抗原與抗體結(jié)合，在兩者比例合適時，可形成較大的不溶性免疫復(fù)合物。在反應(yīng)體系中出現(xiàn)不透明的沉淀物，這種抗原抗體反應(yīng)稱為沉淀反應(yīng)（precipitation neaction）。
1．環(huán)狀沉淀試驗(yàn)先將含抗體的未稀釋的免疫血清加到直徑小于0.5cm的小試管底部。將稀釋的含有可溶性抗原的材料重疊于上，讓抗原與抗體在兩液體的界面相遇，形成白色免疫復(fù)合物沉淀環(huán)，故名為環(huán)狀沉淀試驗(yàn)（ring precipitationtest）,此法簡便易行，需用材料較多是其缺點(diǎn)。
2．單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（single immunodiffusion）是在凝膠中進(jìn)行的沉淀反應(yīng)。將抗體混入加熱溶解的瓊脂中，傾注于玻片上，制成含有抗體的瓊脂板，在適當(dāng)位置打孔，將抗原材料加入瓊脂板的小孔內(nèi)，讓抗原從小孔向四周的瓊脂中擴(kuò)散，與瓊脂中的抗體相遇形成免疫復(fù)合物。當(dāng)復(fù)合物體積增加到一定程度時停止擴(kuò)散，出現(xiàn)以小孔為中心的圓形沉淀圈，沉淀圈的直徑與加入的抗原濃度成正相關(guān)。本方法簡便，易于觀察結(jié)果，可測定抗原的靈敏度（最低濃度）約為10～20μg/ml，常用于定量測定人或動物血清IgG、IgM、IgA和C3等，其缺點(diǎn)是需1～2天才能看結(jié)果（圖20-1）
圖20-1 單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)示意圖
3．免疫比濁法 當(dāng)抗體濃度高，加入少量可溶性抗原，即可形成一些肉眼看不見的小免疫復(fù)合物，它可使通過液體的光束發(fā)生散射，隨著加入抗原增多，形成的免疫復(fù)合物也增多，光散射現(xiàn)象也相應(yīng)加強(qiáng)。免疫比濁法（immunonephelomytry）就是在一定的抗體濃度下，加入一定體積的樣品，經(jīng)過一段時間，用光散射濁度計（nephelometry）測量反應(yīng)液體的濁度，來推算樣品中的抗原含量。本法敏感、快速簡便，可取代單向擴(kuò)散法定量測定免疫球蛋白的濃度。
4，雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn) 雙免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（double immunodiffusion）是在瓊脂板上按一定距離打數(shù)個小孔，在相鄰的兩孔內(nèi)分別放入抗原和抗體材料。當(dāng)抗原和抗體向四周凝膠中擴(kuò)散，在兩孔間可出現(xiàn)2～3條沉淀線，本法常用于抗原或抗體的定性或定量檢測，或用于兩種抗原材料的抗原相關(guān)性分析（圖20-2）。
圖20-2 雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)示意圖
5．對流免疫電泳 對流電泳（counterimmunoelectrophoresis）是一敏感快速的檢測方法，即在電場作用下的雙向免疫擴(kuò)散。將瓊脂板放入電泳槽內(nèi)，使瓊脂板的兩孔沿著電場的方向，于負(fù)極側(cè)的孔內(nèi)加入抗原，于正極側(cè)的孔內(nèi)加入抗體，通電后，抗原帶負(fù)電荷向正極泳動，抗體分子雖也帶負(fù)電荷，但因分子量大，向正極的位移小，而受瓊脂中電滲作用向負(fù)極移動，抗原和抗體能較快地集中在兩孔之間的瓊脂中形成免疫復(fù)合物的沉淀線。只需1小時左右即可觀察結(jié)果。
6．免疫電泳 免疫電泳(immunoelectrophoresis)的方法分成兩個步驟，即先進(jìn)行電泳，再進(jìn)行瓊脂擴(kuò)散。先將樣品加入瓊脂中電泳，將抗原各成分依電泳速度不同而分散開。然后在適當(dāng)?shù)奈恢蒙涎仉娪痉较蛲谝恢本€形槽，于槽內(nèi)加入含有針對各種抗原混合抗體液，讓各抗原成分與相應(yīng)抗體進(jìn)行雙向免疫擴(kuò)散，可形成多答卷沉淀線。常用此法進(jìn)行血清的蛋白種類分析。對于免疫球蛋白缺損或增多的疾病的診斷或鑒別診斷有重要意義（圖20-3）。
圖20-3 免疫電泳法基本步示決圖
7．免疫印跡法免疫印跡法（immunoblotting）又稱為Western印跡法，用于AIDS的血清抗體檢測。第一步，為電泳分離HIV抗原，在電場中根據(jù)分子量大小不同病毒抗原各成分散開。第二步，將電泳分離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上（電印跡），然后將印跡有病毒抗原的硝酸纖維膜浸濕于病人血清中。如果病人血清中含有與一種或幾種抗原相對應(yīng)的抗體的話，則在該抗原印跡部位形成免疫復(fù)合物沉淀。在洗去未沉淀的抗原和抗體后，在膜上加標(biāo)記的抗人免疫球蛋白的抗體，此抗體可以和病毒抗原與人抗體形成的免疫復(fù)合物發(fā)生反應(yīng)，最后加入顯色底物（如果抗人Ig是用酶標(biāo)記的）或做放射自顯影（抗人Ig用125Ⅰ標(biāo)記）以顯示結(jié)果（圖20-4）。
圖20-4 用免疫印跡法檢查患者血清中的HIV病毒抗體
第一步：經(jīng)電泳將HIV混合抗合抗原按分子量大小分離；
第二步：將已分離的抗原經(jīng)電印跡轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上；
第三步：將待檢病人血清加入覆蓋于硝酸纖維膜上；
第四步：加入標(biāo)記的第二抗體使之覆蓋膜上；
第五步：加入顯色底物（或放射自顯影）顯現(xiàn)第二抗體
《女科經(jīng)論》（公元 1689 年）清．蕭塤（賡六）著。八卷。分為月經(jīng)、胎前、產(chǎn)后、崩淋、帶下、雜病等門，辨別虛實(shí)寒熱，詳論治法。
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可溶性抗原與抗體結(jié)合，在兩者比例合適時，可形成較大的不溶性免疫復(fù)合物。在反應(yīng)體系中出現(xiàn)不透明的沉淀物，這種抗原抗體反應(yīng)稱為沉淀反應(yīng)（precipitation neaction）。
1．環(huán)狀沉淀試驗(yàn)先將含抗體的未稀釋的免疫血清加到直徑小于0.5cm的小試管底部。將稀釋的含有可溶性抗原的材料重疊于上，讓抗原與抗體在兩液體的界面相遇，形成白色免疫復(fù)合物沉淀環(huán)，故名為環(huán)狀沉淀試驗(yàn)（ring precipitationtest）,此法簡便易行，需用材料較多是其缺點(diǎn)。
2．單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（single immunodiffusion）是在凝膠中進(jìn)行的沉淀反應(yīng)。將抗體混入加熱溶解的瓊脂中，傾注于玻片上，制成含有抗體的瓊脂板，在適當(dāng)位置打孔，將抗原材料加入瓊脂板的小孔內(nèi)，讓抗原從小孔向四周的瓊脂中擴(kuò)散，與瓊脂中的抗體相遇形成免疫復(fù)合物。當(dāng)復(fù)合物體積增加到一定程度時停止擴(kuò)散，出現(xiàn)以小孔為中心的圓形沉淀圈，沉淀圈的直徑與加入的抗原濃度成正相關(guān)。本方法簡便，易于觀察結(jié)果，可測定抗原的靈敏度（最低濃度）約為10～20μg/ml，常用于定量測定人或動物血清IgG、IgM、IgA和C3等，其缺點(diǎn)是需1～2天才能看結(jié)果（圖20-1）
圖20-1 單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)示意圖
3．免疫比濁法 當(dāng)抗體濃度高，加入少量可溶性抗原，即可形成一些肉眼看不見的小免疫復(fù)合物，它可使通過液體的光束發(fā)生散射，隨著加入抗原增多，形成的免疫復(fù)合物也增多，光散射現(xiàn)象也相應(yīng)加強(qiáng)。免疫比濁法（immunonephelomytry）就是在一定的抗體濃度下，加入一定體積的樣品，經(jīng)過一段時間，用光散射濁度計（nephelometry）測量反應(yīng)液體的濁度，來推算樣品中的抗原含量。本法敏感、快速簡便，可取代單向擴(kuò)散法定量測定免疫球蛋白的濃度。
4，雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn) 雙免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（double immunodiffusion）是在瓊脂板上按一定距離打數(shù)個小孔，在相鄰的兩孔內(nèi)分別放入抗原和抗體材料。當(dāng)抗原和抗體向四周凝膠中擴(kuò)散，在兩孔間可出現(xiàn)2～3條沉淀線，本法常用于抗原或抗體的定性或定量檢測，或用于兩種抗原材料的抗原相關(guān)性分析（圖20-2）。
圖20-2 雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)示意圖
5．對流免疫電泳 對流電泳（counterimmunoelectrophoresis）是一敏感快速的檢測方法，即在電場作用下的雙向免疫擴(kuò)散。將瓊脂板放入電泳槽內(nèi)，使瓊脂板的兩孔沿著電場的方向，于負(fù)極側(cè)的孔內(nèi)加入抗原，于正極側(cè)的孔內(nèi)加入抗體，通電后，抗原帶負(fù)電荷向正極泳動，抗體分子雖也帶負(fù)電荷，但因分子量大，向正極的位移小，而受瓊脂中電滲作用向負(fù)極移動，抗原和抗體能較快地集中在兩孔之間的瓊脂中形成免疫復(fù)合物的沉淀線。只需1小時左右即可觀察結(jié)果。
6．免疫電泳 免疫電泳(immunoelectrophoresis)的方法分成兩個步驟，即先進(jìn)行電泳，再進(jìn)行瓊脂擴(kuò)散。先將樣品加入瓊脂中電泳，將抗原各成分依電泳速度不同而分散開。然后在適當(dāng)?shù)奈恢蒙涎仉娪痉较蛲谝恢本€形槽，于槽內(nèi)加入含有針對各種抗原混合抗體液，讓各抗原成分與相應(yīng)抗體進(jìn)行雙向免疫擴(kuò)散，可形成多答卷沉淀線。常用此法進(jìn)行血清的蛋白種類分析。對于免疫球蛋白缺損或增多的疾病的診斷或鑒別診斷有重要意義（圖20-3）。
圖20-3 免疫電泳法基本步示決圖
7．免疫印跡法免疫印跡法（immunoblotting）又稱為Western印跡法，用于AIDS的血清抗體檢測。第一步，為電泳分離HIV抗原，在電場中根據(jù)分子量大小不同病毒抗原各成分散開。第二步，將電泳分離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上（電印跡），然后將印跡有病毒抗原的硝酸纖維膜浸濕于病人血清中。如果病人血清中含有與一種或幾種抗原相對應(yīng)的抗體的話，則在該抗原印跡部位形成免疫復(fù)合物沉淀。在洗去未沉淀的抗原和抗體后，在膜上加標(biāo)記的抗人免疫球蛋白的抗體，此抗體可以和病毒抗原與人抗體形成的免疫復(fù)合物發(fā)生反應(yīng)，最后加入顯色底物（如果抗人Ig是用酶標(biāo)記的）或做放射自顯影（抗人Ig用125Ⅰ標(biāo)記）以顯示結(jié)果（圖20-4）。
圖20-4 用免疫印跡法檢查患者血清中的HIV病毒抗體
第一步：經(jīng)電泳將HIV混合抗合抗原按分子量大小分離；
第二步：將已分離的抗原經(jīng)電印跡轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上；
第三步：將待檢病人血清加入覆蓋于硝酸纖維膜上；
第四步：加入標(biāo)記的第二抗體使之覆蓋膜上；
第五步：加入顯色底物（或放射自顯影）顯現(xiàn)第二抗體