《細(xì)胞和分子免疫學(xué)》 二、腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞

1986年Rosenberg研究組首先報(bào)道了腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞（tumorinfiltrating lymphocyte,TIL）。TIL細(xì)胞表型具有異質(zhì)性，一般來(lái)說(shuō)，TIL中絕大多數(shù)細(xì)胞CD3陽(yáng)性。不同腫瘤來(lái)源的TIL細(xì)胞中，CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞的比例有差異，大多數(shù)情況下以CD8+T細(xì)胞為主。新鮮分離的TIL中CD25+細(xì)胞百分率較低，隨著體外加IL-2培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，CD25+細(xì)胞百分率逐漸升高。NK細(xì)胞的標(biāo)記（CD16，CD56）在TIL體外加IL-2培養(yǎng)過程中有先增高后降低的趨勢(shì)。

用機(jī)械處理和酶消化方法，從腫瘤局部分離出腫瘤浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞，加入高劑量IL-2體外培養(yǎng)，殘存的腫瘤細(xì)胞7-13天全部死亡。經(jīng)IL-2活化的TIL與來(lái)自PBMC的LAK細(xì)胞比較，其特點(diǎn)是：（1）50-100倍，因此在治療中可以減少效應(yīng)細(xì)胞和IL-2的用量，而且對(duì)LAK治療無(wú)效的晚期腫瘤仍有一定治療效果；（2）主要由CD8陽(yáng)性細(xì)胞誘導(dǎo)而來(lái)，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)TIL殺傷腫瘤作用具有特異性；（3）宿主的抑制狀態(tài)有利于TIL的殺傷作用，因此治療時(shí)加用環(huán)磷酰胺（Cy）100mg/kg可明顯提高療效，可能與免疫抑制藥能消除抑制性細(xì)胞或因子，增強(qiáng)過繼免疫治療作用有關(guān)，因而可減少IL-2的用量，降低毒副反應(yīng)；（4）可從手術(shù)切下腫瘤組織、腫瘤引流淋巴結(jié)、癌性胸腹水中獲得淋巴細(xì)胞，經(jīng)加IL-2培養(yǎng)后，其生長(zhǎng)、擴(kuò)增能力強(qiáng)于LAK細(xì)胞。已有報(bào)道應(yīng)用TIL治療14例轉(zhuǎn)移性肺癌等晚期腫患者，其中4例腫瘤縮小50%以上，副作用明顯低于IL-2/LAK療法。

應(yīng)用LAK或TIL細(xì)胞治療腫瘤國(guó)內(nèi)外進(jìn)展都很快，今后發(fā)展的方向是：（1）提高LAK細(xì)胞的純度，應(yīng)用活化LAK細(xì)胞貼壁的特性，純化粘附LAK（adherent-LAK,A-LAK）細(xì)胞。在IL-2誘導(dǎo)下數(shù)量可增加100倍，而且抗腫瘤轉(zhuǎn)移的作用比LAK強(qiáng)20-50倍。（2）改變繼承轉(zhuǎn)移細(xì)胞在體內(nèi)的分布，如改變注射細(xì)胞途徑和方法，達(dá)到局部/區(qū)域繼承免疫療法的目的。（3）與其它細(xì)胞因子如IL-12、IFN、TNF-α和CSF聯(lián)合治療，增強(qiáng)LAK的殺傷活性，另有報(bào)道，抗CD3單抗與IL-2協(xié)同，能顯著提高LAK細(xì)胞的數(shù)量和殺傷活性。應(yīng)用CD3單抗誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞稱為CD3抗體激活的殺傷細(xì)胞（CD3McAb activated killer cells,CD3AK），抗體含量在10-20ng/ml即可達(dá)到刺激殺傷活性的高峰，體外培養(yǎng)數(shù)天后即可出現(xiàn)明顯的殺傷活性。CD3AK激活需要單核細(xì)胞存在，其增殖速度和細(xì)胞毒活性均高于LAK。所有的D3+CD8+T細(xì)胞和1-6%CD3+CD4+T細(xì)胞可誘導(dǎo)出CD3AK。CD3AK已開支應(yīng)用于臨床。（4）將某些細(xì)胞因子（如IL-2、TNF等）cDNA轉(zhuǎn)染LAK或TIL用于基因治療。

表7-14 影響LAK效應(yīng)的因素及機(jī)理

影響因素調(diào)節(jié)方式效　應(yīng)促進(jìn)作用抑制作用細(xì)胞單核-巨噬細(xì)胞雙向T、NK產(chǎn)生IL-2，表達(dá)高親和性IL-2r產(chǎn)生PGE2，抑制IL-2產(chǎn)生，消炎痛（indomethacin）可解除Mφ抑制作用腫瘤細(xì)胞雙向腫瘤細(xì)胞及其提取物增強(qiáng)混合淋巴細(xì)胞腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)和體外致敏的LAK活性腫瘤細(xì)胞分泌的因子抑制LAK活性中性粒細(xì)胞負(fù)產(chǎn)生超氧化陰離子（O2-）紅細(xì)胞正分泌超氧化物歧化酶，抑制O2-作用，促進(jìn)淋巴細(xì)胞分泌IL-2、IFN-γ和表達(dá)IL-2R細(xì)胞因子IL-1正IL-2、IFN-γ產(chǎn)生和IL-2R表達(dá)，增強(qiáng)LAK的ADCC效應(yīng)IL-3正+IL-4雙向+，多為小鼠實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)-，抑制IL-2誘導(dǎo)的LAK活性IL-5正協(xié)同IL-2誘導(dǎo)LAK活性IL-6正協(xié)同IL-2誘導(dǎo)LAK活性IL-7正單獨(dú)可誘導(dǎo)LAK活性IL-12正協(xié)同IL-2誘導(dǎo)LAK活性GM-CSF正促進(jìn)Mφ分泌IL-1、TNF-αTNF-α正與IL-2有協(xié)同作用，LAK分泌TNF-α直接作用IFN-γ雙向促進(jìn)LAK分化可通過單核-巨噬細(xì)胞分泌PGE2抑制LAK活性IFN-β負(fù)抑制細(xì)胞因子產(chǎn)生和受體抑制細(xì)胞因子產(chǎn)生和受體表達(dá)LR正促進(jìn)LAK殺傷活性抗體抗腫瘤細(xì)胞正促進(jìn)LAK的ADCC抗CD3正與IL-2聯(lián)合應(yīng)用，促進(jìn)LAK活性，增加LAK數(shù)量抗Tac，抗TfR負(fù)封閉細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)抗IFA-1負(fù)抑制效應(yīng)細(xì)胞-靶細(xì)胞粘附抗LAK-1負(fù)雙特異性抗體正抗腫瘤和CD3McAb重構(gòu)的雙特異性抗體多糖激素神經(jīng)肽蘑菇多糖、黃芪正去甲腎上腺素正激活PKC生長(zhǎng)抑素正抑制腺苷酸環(huán)化酶糖皮質(zhì)激素負(fù)-PGE2負(fù)β-內(nèi)啡肽負(fù)環(huán)孢菌素A負(fù)-

表7-15 生藥活性多糖對(duì)細(xì)胞因子產(chǎn)生、淋巴細(xì)胞功能和抗腫瘤的增強(qiáng)作用

名稱調(diào)節(jié)作用應(yīng)用范圍香菇多糖（Lentinan）促進(jìn)IL-1、IL-2產(chǎn)生免疫增強(qiáng)劑抗腫瘤提高Th功能促進(jìn)T細(xì)胞分化和CTL殺傷活性協(xié)同IL-2激活的LAK殺傷活性協(xié)同IL-2激活的LAK殺傷活性枸杞子多糖（Kycium　Bsrbarum polysaccharide,LBS）促進(jìn)IL-2分泌調(diào)節(jié)免疫功能抗衰老
抗腫瘤（動(dòng)物實(shí)驗(yàn)）刺五加多糖（polysaccharide　of Acanthopanax Senlicosus,PAS）促進(jìn)淋巴細(xì)胞對(duì)絲裂原的抗癌、抗白血病增殖反應(yīng)
協(xié)同ConA誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞分泌IL-2誘生IFN促進(jìn)CTL活性（動(dòng)物實(shí)驗(yàn)）黃芪多糖（Astragalus　polysaccharide,APS）促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖治療化療引起增強(qiáng)Th功能的免疫抑制增強(qiáng)病毒誘生IFN促進(jìn)IL-1、IL-2產(chǎn)生F3成份增強(qiáng)LAK活性