多肽物質(zhì)分子量檢測(cè)技術(shù)

隨著分子生物學(xué)和生物技術(shù)的飛速發(fā)展，具有高生物活性的多肽類化合物的分離、純化和分析已顯得尤為突出。許多分離、純化和分析技術(shù)都是以分子量的大小為手段的，現(xiàn)將我們采用的幾種主要的技術(shù)介紹如下：凝膠過(guò)濾測(cè)相對(duì)分子量該技術(shù)即凝膠過(guò)濾層析，也稱分子排阻層析或凝膠滲透。利用凝膠過(guò)濾可以把蛋白質(zhì)多肽類混合物按分子量的大小分離出來(lái)。當(dāng)不同分子大小的蛋白質(zhì)多肽類混合物流經(jīng)凝膠層析柱時(shí)，由于不同大小的分子所經(jīng)路徑不同而得到分離，大分子先被洗脫出來(lái)，小分子后被洗脫出來(lái)。

該方法簡(jiǎn)單，不要求復(fù)雜的儀器就可較準(zhǔn)確地測(cè)出蛋白質(zhì)多肽的相對(duì)分子量。另外，利用該技術(shù)測(cè)Mr（相對(duì)分子量）還有一個(gè)優(yōu)點(diǎn)，即待測(cè)物可以不純。

該技術(shù)一般采用交聯(lián)葡聚糖為基質(zhì)，其商業(yè)名稱為Sephadex。根據(jù)需要可選用SephadexG－25（分級(jí)分離的Mr范圍5000以下）、SephadexG－75（Mr范圍3000～80000）、SephadexG－100(Mr范圍4000～150000)。實(shí)驗(yàn)時(shí)，以蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)的分子量對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)、洗脫體積為橫坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)待測(cè)品的洗脫體積從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出它的Mr。SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳測(cè)相對(duì)分子量在聚丙烯酰胺凝膠電泳系統(tǒng)中加入陰離子去污劑十二烷基磺酸鈉（SDS）和少量巰基乙醇，蛋白質(zhì)多肽類混合物的電泳遷移率將主要取決于它們的相對(duì)分子量，而與電荷和形狀無(wú)關(guān)。

目前，對(duì)于小分子多肽的SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳，選擇合適的系統(tǒng)及合適的分離膠、濃縮膠甚至是間隙膠的濃度和交聯(lián)度一直是人們研究的熱點(diǎn)。另外，應(yīng)選擇合適的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)分子量范圍，使得待測(cè)品的分子量能落在此范圍內(nèi)。

實(shí)驗(yàn)測(cè)定時(shí)，以各種標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的Mr的對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)，其μR（相對(duì)遷移率）為橫坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)待測(cè)品的μR從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出它們的Mr。高效凝膠排阻色譜（HPSEC）技術(shù)測(cè)相對(duì)分子量HPSEC是一種基于分子篩原理與高速流動(dòng)的流動(dòng)相的層析分離方法，該技術(shù)快速、靈敏、高效，對(duì)于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的處理與凝膠過(guò)濾一樣。

固定相的孔徑大小及流動(dòng)相速度直接影響分離效果。固定相原材料主要有Sw和Pw兩種，但一般情況下，仍首先考慮采用Sw型。主要規(guī)格有TSK－2000Sw(適合于5000～100000的蛋白多肽)、TSK－4000Sw(適合50000～1000000)等。流動(dòng)相一般為緩沖液（常用磷酸或醋酸緩沖液），也可含有機(jī)溶劑（甲醇或乙腈）和變性劑（尿素、胍、SDS）。

以上簡(jiǎn)要介紹了多肽類分子量測(cè)定的幾種常用技術(shù)。隨著科學(xué)技術(shù)水平的不斷發(fā)展，會(huì)有許多更新的技術(shù)不斷涌現(xiàn)，因此這一領(lǐng)域的研究具有廣闊的前景。