《生物化學(xué)與分子生物學(xué)》 三、限制性核酸內(nèi)切酶的分類

按限制酶的組成、與修飾酶活性關(guān)系，切斷核酸的情況不同，分為三類：

Ⅰ類限制性核酸內(nèi)切酶　由3種不同亞基構(gòu)成，兼具有修飾酶活性和依賴于ATP的限制性內(nèi)切酶活性，它能識(shí)別和結(jié)合于特定的DNA序列位點(diǎn)，去隨機(jī)切斷在識(shí)別位點(diǎn)以外的DNA序列，通常在識(shí)別位點(diǎn)周圍400-700bp。這類酶的作用需要Mg2+，S腺苷甲硫氨酸及ATP。

Ⅱ類限制性核酸內(nèi)切酶 與Ⅰ類酶相似，是多亞蛋白質(zhì)，既有內(nèi)切酶活性，又有修飾酶活性，切斷位點(diǎn)在識(shí)別序列周圍25-30bp范圍內(nèi)，酶促反應(yīng)除Mg2+外，也需要ATP供給能量。

Ⅲ類限制性核酸內(nèi)切酶　只由一條肽鏈構(gòu)成，僅需Mg2+，切割DNA特異性最強(qiáng)，且就在識(shí)別位點(diǎn)范圍內(nèi)切斷DNA。是分子生物學(xué)中應(yīng)用最廣的限制性內(nèi)切酶。通常在重組DNA技術(shù)提到的限制性核酸內(nèi)切酶主要指Ⅱ類酶而言。

表20-1 DNA重組技術(shù)中最常用的工具酶

酶主要用途限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別DNA特定序列，切斷DNA鏈DNA聚合酶Ⅰ或其大片段（Klenow）①缺口平移制作標(biāo)記DNA探針
②合成cDNA的第二鏈
③填補(bǔ)雙鏈DNA3’凹端
④DNA序列分析耐熱DNA聚合酶（Taq DNA聚合酶等）聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）DNA連接酶連接兩個(gè)DNA分子或片段多核苷酸激酶催化多核苷酸5’羥基末端磷酸化，制備末端標(biāo)記探針末端轉(zhuǎn)移酶在3’末端加入同質(zhì)多聚物尾SI核酸酶，綠豆核酸酶降解單鏈DNA或RNA，使雙鏈DNA突出端變?yōu)槠蕉薉NA端酶Ⅰ降解DNA，在雙鏈DNA上產(chǎn)生隨機(jī)切口RNA酶A降解除RNA磷酸酶切除核酸末端磷酸基