《動脈粥樣硬化》 二、MTP基因結(jié)構(gòu)

1993年Sharp D.等克隆MTP 88kD大亞基的cDNA并進行序列分析，比較人和牛的cDNA表明有88%核苷酸序列相同，在人MTP大亞基的3'末端有基因組DNA編碼的18個腺苷酸殘基，預(yù)測的分子量97kDa，人和牛MTP大亞基單位氨基酸有86%同源性，加上保守性氨基酸替換，人與牛MTP大亞基單位有94%同源性。在核苷酸和蛋白序列數(shù)據(jù)庫中未發(fā)現(xiàn)其他蛋白與之同源。

SharpD.等MTP88kD大亞基基因結(jié)構(gòu)進行分析（圖7-7）。其基因跨越55～60Kb，由18個外顯子組成，外顯子1和18也分別包括5'和3'的非編碼序列。除掉含非編碼序列的外顯子1和18，平均每個編碼外顯子的長度是153bp。

圖7-7 人MTP大亞基的基因結(jié)構(gòu)

上線表明基因跨度；第二線為MTP大亞基的18個外顯子

示意圖；第三四線分別是EcoRI（R）和Hind（H）的酶切位點。

SharpD等早期報道，人MTp cDNA 5'端非編碼區(qū)有64個核苷酸。用錨定PCR檢測MTpcDNA的5'末端，從兩個獨立PCR產(chǎn)物的直接序列分析揭示，從翻譯起始的上游有86bp的非編碼序列（見圖7-8）。所有86bp5'端非翻譯區(qū)均編碼外顯子1，外顯子1還有61bp編碼信號肽及成熟蛋白2個氨基酸。在翻譯起始框外上游25bp有一個ATG，但該處沒有適合的起始環(huán)境，第二個ATG是真正的翻譯起始點。

圖7-8 MTP大亞基的5'側(cè)翼序列

轉(zhuǎn)錄起始點5'側(cè)翼序列不含TATA盒，但富含AT序列，在轉(zhuǎn)錄起始點上游約30bp的AAAGATAAA可能被TATA結(jié)合蛋白（TFⅡD）識別。用Nothern blot雜交及分析MTP活性表明MTP在肝和腸表達，在卵巢、睪丸和腎也發(fā)現(xiàn)有低水平MTp mRNA表達。計算機輔助分析轉(zhuǎn)錄起始點上游743bp序列表明，他與幾種已知順式作用元件同源，可調(diào)節(jié)MTP組織特性性表達。在轉(zhuǎn)錄起始點第一個200bp序列含肝特異C/EBP、HNF-1和HNF-5轉(zhuǎn)錄因子識別的上游啟動子元件，該區(qū)還含有通用轉(zhuǎn)錄因子Sp-1和Ap-1識別序列。Sp-1，C/EBP、HNF-1和HNF-5在該區(qū)的位點有單個堿基錯配。其他比第一個200bp更上游的順式元件可被HNF-5，C/EBP和CTF/NF-1識別。

MTP大亞基限制性片段長度多態(tài)性分析或簡單序列的串聯(lián)重復(fù)多態(tài)性分析，均可用于調(diào)查MTP基因與異常血漿脂類或脂蛋白代謝的聯(lián)系。CA雙核苷酸重復(fù)多態(tài)性在人基因組隨處可見，這種重復(fù)可用PCR分析，因而是一種理想的基因標記。為了識別CA雙核苷酸重復(fù)序列，用一個CA重復(fù)的探針來與MTP大亞基因進行雜交，在內(nèi)含子10發(fā)現(xiàn)非完整CA重復(fù)結(jié)構(gòu)(CA)4AA(CA)3GA(CA)4TA(CA)nTACA,分析18個不相關(guān)個體的36個等位基因表明有8種變異，n從8到17。熒光原位雜交表明MTP大亞基基因位于4號染色體，即4q28-q31。